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蛋白質(zhì)的特性:大腸桿菌與密碼子用法:—般來(lái)說(shuō),在重組蛋白表達(dá)宿主的選擇中,對(duì)原核來(lái)源的蛋白質(zhì)應(yīng)當(dāng)只選擇大腸桿菌進(jìn)行表達(dá),而不是真核表達(dá)系統(tǒng),因?yàn)橥ǔU婧松锏姆g后修飾能力和改善的折疊能力對(duì)原核的蛋白來(lái)說(shuō)是不必要的,甚至是不想要的。對(duì)于真核的蛋白來(lái)說(shuō)情況就不同了,因?yàn)橛写罅康膶?shí)例表明,真核的蛋白能在大腸桿菌中進(jìn)行成功地表達(dá)。當(dāng)使用原核系統(tǒng)表達(dá)真核的蛋白時(shí) ,一個(gè)非常重要的考慮是: 像所有生物一樣,大腸桿菌對(duì)密碼子的使用有偏性,其tRNA豐度反映了這一偏性。表達(dá)含有數(shù)個(gè)大腸桿菌稀有密碼子的真核的蛋白時(shí)會(huì)受對(duì)應(yīng)的 tRNA豐度的限制而效率不高。 氨基酸的理化性質(zhì):由遺傳密碼直接編碼的20種氨基酸可以根據(jù)它們的特性分成幾組。35303-76-5
蛋白質(zhì)純化:為了進(jìn)行體外(in vitro)研究,必須先將目的蛋白質(zhì)從其他細(xì)胞組分中分離提純出來(lái)。這一過(guò)程通常從細(xì)胞裂解開(kāi)始(對(duì)于分泌性蛋白質(zhì)的提純則不需要裂解細(xì)胞),通過(guò)破壞細(xì)胞膜將細(xì)胞內(nèi)含物釋放到溶液中,從而獲得含有目的蛋白質(zhì)的細(xì)胞裂解液。然后通過(guò)超速離心將細(xì)胞裂解液中膜脂和膜蛋白、細(xì)胞器、核酸以及含有可溶蛋白質(zhì)的混合物分離出來(lái)。鹽析法是一種較為常用的通過(guò)沉淀從裂解液中分離濃縮蛋白質(zhì)的方法?;谀康牡鞍踪|(zhì)的化學(xué)性質(zhì)(如分子量、帶電情況和結(jié)合活性),可以利用不同的色譜法來(lái)進(jìn)一步分離提純蛋白質(zhì)。純化的程度可以用電泳(已知目的蛋白質(zhì)的分子量)、光譜學(xué)(目的蛋白質(zhì)具有獨(dú)特的光譜學(xué)特征)或者酶活分析反應(yīng)(目的蛋白質(zhì)具有特定的酶活性)來(lái)衡量。另外,蛋白質(zhì)可以使用電聚焦根據(jù)其電荷被分離。6358-69-6氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位,氨基酸通過(guò)脫水縮合連成肽鏈。
氨基酸有什么用:1.完成消化和吸收功能 蛋白質(zhì)在食物中的作用是非常重要的,但它在人體內(nèi)并不能直接被利用,而是通過(guò)變成氨基酸小分子后被利用的。因此蛋白質(zhì)在機(jī)體內(nèi)的消化和吸收是通過(guò)氨基酸來(lái)完成的。2.起氮平衡作用 正常人每日食進(jìn)的蛋白質(zhì)應(yīng)保持在一定范圍內(nèi),超量或不足都會(huì)影響身體機(jī)能,打破平衡機(jī)制,如不及時(shí)采取措施糾正,將導(dǎo)致抗體死亡,因此氨基酸在保持人體內(nèi)氮的總平衡過(guò)程中起著非常重要的作用。3.維持人體正常代謝 有的維生素是由氨基酸轉(zhuǎn)變或與蛋白質(zhì)結(jié)合存在。而酶、、維生素在調(diào)節(jié)生理機(jī)能、催化代謝過(guò)程中起著十分重要的作用。
氨基酸是什么?哪些是比較重要的:必需氨基酸 必需氨基酸(essential amino acid) 指人體(或其它脊椎動(dòng)物)不能合成或合成 : 必需氨基酸 速度遠(yuǎn)不適應(yīng)機(jī)體的需要,必需由食物蛋白供給,這些氨基酸稱為必需氨基酸。成人必需氨 基酸的需要量約為蛋白質(zhì)需要量的 20%~37%。共有 8 種其作用分別是: 賴氨酸:促進(jìn)大腦發(fā)育,是肝及膽的組成成分,能促進(jìn)脂肪代謝,調(diào)節(jié)松果腺、乳腺、 黃體及卵巢,防止細(xì)胞退化; 色氨酸:促進(jìn)胃液及胰液的產(chǎn)生; 苯丙氨酸:參與消除腎及膀胱功能的損耗; 蛋氨酸(甲硫氨酸) :參與組成血紅蛋白、組織與血清,有促進(jìn)脾臟、胰臟及淋巴的功 能; 蘇氨酸:有轉(zhuǎn)變某些氨基酸達(dá)到平衡的功能; 異亮氨酸: 參與胸腺、 脾臟及腦下腺的調(diào)節(jié)以及代謝; 腦下腺屬總司令部作用于甲狀腺、 性腺; 亮氨酸:作用平衡異亮氨酸; 纈氨酸:作用于黃體、乳腺及卵巢。氨基酸的作用:氨基酸分解代謝所產(chǎn)生的的a-酮酸。
生物合成:在植物中,氮首先以谷氨酸的形式被吸收為有機(jī)化合物,谷氨酸是由線粒體中的α-酮戊二酸和氨形成的。對(duì)于其他氨基酸,植物利用轉(zhuǎn)氨酶將氨基從谷氨酸轉(zhuǎn)移到另一種α-酮酸。例如,天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶將谷氨酸和草酰乙酸轉(zhuǎn)化為α-酮戊二酸和天冬氨酸。其他生物體也使用轉(zhuǎn)氨酶來(lái)合成氨基酸。非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸通常是通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的修飾形成的。例如,同型半胱氨酸是通過(guò)轉(zhuǎn)硫途徑形成的,或者是通過(guò)甲硫氨酸經(jīng)由中間代謝物腺苷甲硫氨酸的去甲基化形成的,而羥脯氨酸是由脯氨酸的翻譯后修飾產(chǎn)生的。氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位,賦予蛋白質(zhì)特定的分子結(jié)構(gòu)形態(tài),使其分子具有生化活性。4425-56-3
氨基酸的作用與功效:?jiǎn)?dòng)皮膚細(xì)胞超氧化物岐化酶過(guò)氧化物的活性。35303-76-5
蛋白質(zhì)的細(xì)胞功能:蛋白質(zhì)功能發(fā)揮的關(guān)鍵在于能夠特異性地并且以不同的親和力與其他各類分子,包括蛋白質(zhì)分子結(jié)合。蛋白質(zhì)結(jié)合其他分子的區(qū)域被稱為結(jié)合位點(diǎn),而結(jié)合位點(diǎn)常常是從蛋白質(zhì)分子表面下陷的一個(gè)“口袋”;而結(jié)合能力與蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)密切相關(guān),因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)決定了結(jié)合位點(diǎn)的形狀和化學(xué)性質(zhì)(即結(jié)合位點(diǎn)周圍的氨基酸殘基的側(cè)鏈的化學(xué)性質(zhì))。蛋白質(zhì)結(jié)合的緊密性和特異性可以非常高;例如,核糖核酸酶克制蛋白可以與人的血管促生蛋白以亞飛摩爾(sub-femtomolar,即<10-15 M)量級(jí)的解離常數(shù)進(jìn)行結(jié)合,但卻完全不結(jié)合(解離常數(shù)>1 M)angiogenin在兩棲動(dòng)物中的同源蛋白抗核糖核酸酶。35303-76-5