2025-05-10
二、成分提取
1. 初步分離
離心:低速離心(如500-1000×g,5分鐘)去除未破碎的細(xì)胞碎片;高速離心(如10,000×g,15分鐘)分離細(xì)胞器(如線粒體、細(xì)胞核)。
過濾:用濾膜(如0.22μm或0.45μm)去除大顆粒雜質(zhì)。
2. 目標(biāo)成分純化
蛋白質(zhì)提取:
使用裂解液(含去垢劑、鹽和緩沖液)溶解蛋白。
離心后收集上清液,通過親和層析(如His標(biāo)簽純化)、沉淀法(如硫酸銨沉淀)或電泳分離。
核酸提?。?
DNA:酚-氯仿抽提去除蛋白質(zhì),乙醇沉淀純化。
RNA:TRIzol法提取,注意避免RNase污染。
細(xì)胞器分離:
差速離心或密度梯度離心(如蔗糖梯度)分離線粒體、葉綠體等。
代謝物提?。?
有機溶劑(如甲醇、乙腈)萃取,或冷凍干燥后溶解。
3. 濃縮與保存
濃縮:超濾離心管、凍干或真空濃縮。
保存:分裝后低溫保存(-20℃或-80℃),避免反復(fù)凍融。
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