病毒作為基因載體已普遍用于基因和細胞醫(yī)治產(chǎn)品。目前常見的病毒載體包括慢病毒(Lentiviral)、逆轉(zhuǎn)錄病毒(Retrovirus)、腺病毒(Adenovirus)、腺相關(guān)病毒(AAV)等。在生產(chǎn)過程中,如果被有復制能力的病毒污染,或載體發(fā)生重組,病毒載體中可能會混雜有復制型病毒。復制型慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒(RCL/RCR)可將病毒基因組整合到細胞基因組中,存在激 活原ai基因、破壞抑ai基因造成二次中瘤的風險;同時因其具有復制性,且用水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)替代了env編碼的包膜糖蛋白,提高了病毒的嗜性范圍,增加RCR/RCL帶來的潛在風險;而如果出現(xiàn)復制型腺相關(guān)病毒(rcAAV),其則會在被感 染的細胞中表達cap或rep基因,容易導致意外的免疫反應。因此,各國法規(guī)對復制性 病毒檢測都提出了明確要求。復制型病毒檢測試劑盒要求有哪些?廣州重組腺相關(guān)病毒檢測原理
南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、RCR基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、rcAAV-5/N檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)既適用于基于細胞培養(yǎng)法對復制型病毒的qPCR法的檢測,也適用于對無細胞基質(zhì)的病毒收獲液(上清液)等樣品的復制型病毒檢測。試劑盒進行了多面的性能驗證,靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好、符合法規(guī)要求。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、RCR基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、rcAAV-5/N檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)既適用于基于細胞培養(yǎng)法對復制型病毒的qPCR法的檢測,也適用于對無細胞基質(zhì)的病毒收獲液(上清液)等樣品的復制型病毒檢測。試劑盒進行了多面的性能驗證,靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好、符合法規(guī)要求。杭州rcAAV病毒檢測服務復制型慢病毒檢測方法有哪些?
南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL復制型慢病毒/RCR復制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測試劑盒的特點:①檢測試劑盒采用qRT-PCR原理,操作便捷,2-3小時可出結(jié)果。②試劑盒檢測體系經(jīng)過精心研發(fā),可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測反應中產(chǎn)生擴增,可以蕞大程度的減少檢測過程中污染情況的發(fā)生。③RCL和RCR病毒檢測方法成熟,試劑盒性能穩(wěn)定,檢測靈敏度高,可以快速準確的獲得供試品中靶向基因的含量,幫助研究者進行分析。歡迎聯(lián)系!
根據(jù)FDA2006年發(fā)布的關(guān)于RCR復制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測的指南和2018年新更新的檢測指南征求意見稿,目前RCR復制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/RCL復制型慢病毒檢測的金標準是共培養(yǎng)法,即將測試樣品(病毒載體上清液、生產(chǎn)終末細胞、體外轉(zhuǎn)導細胞等)與允許細胞系進行共培養(yǎng),至少5次傳代以擴增任何潛在的RCR復制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/RCL復制型慢病毒,然后在指示階段,通過檢測特異性核酸、蛋白的方法進行測定,qPCR/RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,是RCR/RCL檢測的優(yōu) 選方法。南京正揚的重組腺相關(guān)病毒檢測試劑盒性能如何?
南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL復制型慢病毒檢測試劑盒適用于定量檢測慢病毒載體生產(chǎn)的細胞醫(yī)治產(chǎn)品和基因醫(yī)治產(chǎn)品中復制型慢病毒RCL,如生產(chǎn)病毒的細胞庫、終末細胞、病毒載體及CAR-T細胞。采用熒光探針RT-PCR的方法檢測慢病毒載體上特定序列,配套有RCL定量參考品,用于精確定量樣品中復制型慢病毒RCL的拷貝數(shù),產(chǎn)品具備檢測性能可靠、靈敏度高、特異性好、操作便捷快速等優(yōu)點。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL復制型慢病毒檢測試劑盒適用于定量檢測慢病毒載體生產(chǎn)的細胞醫(yī)治產(chǎn)品和基因醫(yī)治產(chǎn)品中復制型慢病毒RCL,如生產(chǎn)病毒的細胞庫、終末細胞、病毒載體及CAR-T細胞。采用熒光探針RT-PCR的方法檢測慢病毒載體上特定序列,配套有RCL定量參考品,用于精確定量樣品中復制型慢病毒RCL的拷貝數(shù),產(chǎn)品具備檢測性能可靠、靈敏度高、特異性好、操作便捷快速等優(yōu)點。重組腺相關(guān)病毒檢測要求有哪些?蘇州qPCR法病毒檢測品牌
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用qPCR法進行rcAAV復制型腺相關(guān)病毒檢測時,出現(xiàn)擴增曲線復孔間熒光信號值降低及復孔間擴增曲線重復性差的原因可能是什么?復孔間部分曲線熒光信號值降低的現(xiàn)象比較常見,通常與反應管內(nèi)存在氣泡相關(guān),隨反應溫度升高,氣泡破裂導致熒光信號值降低。上機前需仔細檢查反應管內(nèi)是否有氣泡殘留。另外,針對加樣誤差引起的復孔間重復性差,實驗人員上崗前需加強培訓并考核,移液器務必定期校準并正確掌握使用方法。此外,還需注意確保試劑與樣品混勻,離心后再上機。廣州重組腺相關(guān)病毒檢測原理