常用的支原體檢測方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)則靈敏度比較低,因背景熒光的存在,細(xì)胞輕度支原體污染不易檢出;細(xì)胞裂解死亡產(chǎn)生碎片也會被熒光染料染色被誤認(rèn)為是支原體染色所致造成假陽性;另外,熒光染色法一般要求培養(yǎng)無污染的指示細(xì)胞作為對照,增加了檢測的工作量。目前,PCR法為主流的支原體檢測手段,PCR法比傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法檢測時間大縮短,且靈敏度高。支原體檢測方法有哪些。寧波PCR法支原體檢測常見問題
在進(jìn)行支原體檢測之前,對支原體DNA進(jìn)行提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA,以便進(jìn)行后續(xù)的檢測和分析。以下是進(jìn)行支原體DNA提取的主要原因和目的:去除抑制物質(zhì):某些樣品中可能含有對PCR或其他分子檢測方法有抑制作用的物質(zhì),如酶抑制劑、有機(jī)溶劑等。支原體DNA提取過程可以幫助去除這些抑制物質(zhì),提高后續(xù)PCR或分子檢測的成功率。保護(hù)DNA完整性:支原體DNA在樣品中容易受到外界環(huán)境的影響和降解。提取過程中的適當(dāng)處理可以保護(hù)DNA的完整性,防止其在提取過程中受到損傷。杭州快速支原體檢測公司支原體檢測的背景知識與法規(guī)要求。
我國藥典規(guī)定的支原體檢測方法為培養(yǎng)法和指示細(xì)胞染色法。但這些方法也存在一些不盡人意之處,如所需時間較長,有的操作復(fù)雜等?!吨袊幍?020年版3301支原體檢測法》中指出:除培養(yǎng)法和DNA染色法外,也可采用經(jīng)國家藥品檢定機(jī)構(gòu)認(rèn)可的其他方法,對支原體進(jìn)行檢測。由于支原體檢測存在必要性,如何盡可能提高檢測的準(zhǔn)確率以及效率尤為關(guān)鍵。不少業(yè)內(nèi)指導(dǎo)原則指出,支原體的核酸法檢測,通過嚴(yán)格且充分的方法學(xué)驗(yàn)證,可以替代藥典中對的培養(yǎng)法與DNA染色法。
常用的支原體檢測方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。分離培養(yǎng)法基本不會出現(xiàn)假陰性結(jié)果,因此被譽(yù)為支原體檢測金標(biāo)準(zhǔn)。不過也存在四個弊端,一是檢測時間太長,支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間;二是盡管可以檢測絕大多數(shù)支原體種類,分離培養(yǎng)法也有力所不及的時候,例如豬鼻支原體(M.hyorhinis);三是易出現(xiàn)假陽性,因?yàn)樵谂囵B(yǎng)時需以陽性菌株為對照,易出現(xiàn)交叉污染;四是對實(shí)驗(yàn)室條件要求比較高。被污染的細(xì)胞如何做支原體檢測?
南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒在PCR試劑配制及加樣上機(jī)環(huán)節(jié)有哪些注意事項(xiàng)?①避免在不必要的情況下凍融試劑盒中的試劑,檢測試劑盒需避光儲存于-18℃以下;②本試劑盒所用的試劑不能隨意替換,以免影響檢測效果。不同批號的試劑盒各成分也不可相互混用;③嚴(yán)格區(qū)分質(zhì)控品和反應(yīng)試劑的使用,防止試劑的污染,導(dǎo)致假陽性;④完成實(shí)驗(yàn)后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺與移液器。PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)中污染問題時常發(fā)生,常見的有以下幾種污染類型:擴(kuò)增產(chǎn)物的污染、天然基因組DNA污染、試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。擴(kuò)增產(chǎn)物污染是蕞嚴(yán)重、蕞難以處理的的污染類型,由于一旦發(fā)生PCR產(chǎn)物污染,實(shí)驗(yàn)室必須停止實(shí)驗(yàn),直至污染被完全清 除為止,PCR產(chǎn)物污染短時間內(nèi)很難消除,一般需要2-4周才能消除,而且實(shí)驗(yàn)相關(guān)的試劑、耗材有很大可能會被污染,需全部更換。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒,試劑盒經(jīng)過精心開發(fā),可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測反應(yīng)中產(chǎn)生擴(kuò)增,由此避免污染物帶來的檢測誤差,減少實(shí)驗(yàn)室污染造成檢測結(jié)果不準(zhǔn)確的可能性。qPCR法支原體檢測的優(yōu)點(diǎn)有哪些?上海便捷支原體檢測注意事項(xiàng)
生物制品支原體檢測。寧波PCR法支原體檢測常見問題
隨著我國生物藥以及細(xì)胞治 療相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,相關(guān)的法律法規(guī)也在不斷健全。支原體檢測就是其中必不可少的一項(xiàng)。準(zhǔn)確進(jìn)行支原體檢測,是避免外源因子污染,保證產(chǎn)品質(zhì)量的重要質(zhì)控手段。南京正揚(yáng)生物科技有限公司的qPCR法支原體檢測試劑盒,檢測體系(包括提取和檢測)由全球蕞大第三方實(shí)驗(yàn)室Eurofins權(quán) 威認(rèn)證,驗(yàn)證報告具備公正性、權(quán) 威性,達(dá)到歐洲藥典(EP2.6.7)和日本藥典(JPG3)要求。每個批次產(chǎn)品均有廠家的質(zhì)檢報告(COA)。寧波PCR法支原體檢測常見問題