CAR-T的生產(chǎn)中常用慢病毒載體將CAR基因高效地導入T細胞中。盡管慢病毒載體具有復制缺陷，但如果在慢病毒生產(chǎn)過程中發(fā)生重組可能有形成復制型慢病毒（RCL）或復制型逆轉錄病毒（RCR）的潛在風險。根據(jù)蕞新發(fā)布的《體外基因修飾系統(tǒng)藥學研究與評價技術指導原則（試行）》和《免疫細胞治   療產(chǎn)品藥學研究與評價技術指導原則（試行）》,復制型病毒作為重要的安全性風險關注點，需評估制備和臨床使用的風險。因此使用慢病毒載體相關的細胞產(chǎn)品，RCL和RCR病毒檢測作為安全性檢測在細胞藥物的研發(fā)和生產(chǎn)過程中至關重要。復制型慢病毒檢測方法有哪些？上海病毒檢測服務

采用何種方法進行RCR/RCL病毒檢測？復制型病毒（RCR/RCL）是γ-逆轉錄病毒載體與慢病毒載體的一個安全性質量控制項目，因病毒載體設計的不同，產(chǎn)生復制型病毒的風險也會有不同，如采用四質粒共轉體系以及含有末端自我失活（SelfInactivating，SIN）結構的病毒載體，其病毒載體生產(chǎn)過程中產(chǎn)生RCL的風險會明顯降低，但盡管如此，產(chǎn)生RCR/RCL的風險仍不能完全排除，因此仍需要對病毒載體進行RCR/RCL的檢測，且病毒載體不得檢出RCR/RCL。RT-PCR法病毒檢測特點qPCR法復制型慢病毒檢測的工作流程。

RCL/RCR病毒檢測的方法FDA推薦的RCL檢測方法是利用敏感細胞對病毒載體中可能存在的RCL進行培養(yǎng)擴增，并在培養(yǎng)終點進行檢測。?擴增期：將待測物與對HIV-1易感并且可大量擴增病毒的細胞系(通常用C8166)孵育，細胞傳代5次以上，培養(yǎng)至少3周。?指示期：3周后收集培養(yǎng)上清，接種于C8166細胞中培養(yǎng)7d后檢測RCL標志物。?檢測：A：P24ELLISA的方法：適用于由載體制備過程中病毒基因組之間的重組形成RCL的檢測。B：PERT法：當RCL進行擴增后，也可應用PERT檢測方法測定逆轉錄酶活性。該方法的缺點是在某些細胞中存在高背景。C：qPCR方法：采用實時定量PCR方法(Q-PCR)測定假型病毒

南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL復制型慢病毒/RCR復制型逆轉錄病毒檢測試劑盒的特點：①檢測試劑盒采用qRT-PCR原理，操作便捷，2-3小時可出結果。②試劑盒檢測體系經(jīng)過精心研發(fā)，可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測反應中產(chǎn)生擴增，可以蕞大程度的減少檢測過程中污染情況的發(fā)生。③RCL和RCR病毒檢測方法成熟，試劑盒性能穩(wěn)定，檢測靈敏度高，可以快速準確的獲得供試品中靶向基因的含量，幫助研究者進行分析。歡迎聯(lián)系！重組腺相關病毒檢測。

病毒作為基因載體已普遍用于基因和細胞醫(yī)治產(chǎn)品。目前常見的病毒載體包括慢病毒（Lentiviral）、逆轉錄病毒（Retrovirus）、腺病毒（Adenovirus）、腺相關病毒（AAV）等。在生產(chǎn)過程中，如果被有復制能力的病毒污染，或載體發(fā)生重組，病毒載體中可能會混雜有復制型病毒。復制型慢病毒/逆轉錄病毒（RCL/RCR）可將病毒基因組整合到細胞基因組中，存在激   活原ai基因、破壞抑ai基因造成二次中瘤的風險；同時因其具有復制性，且用水泡性口炎病毒糖蛋白（VSV-G）替代了env編碼的包膜糖蛋白，提高了病毒的嗜性范圍，增加RCR/RCL帶來的潛在風險；而如果出現(xiàn)復制型腺相關病毒（rcAAV），其則會在被感   染的細胞中表達cap或rep基因，容易導致意外的免疫反應。因此，各國法規(guī)對復制性   病毒檢測都提出了明確要求。為什么要做復制型逆轉錄病毒檢測？上海RCL病毒檢測常見問題

復制型病毒檢測試劑盒方法有哪些？上海病毒檢測服務

用qPCR法進行rcAAV復制型腺相關病毒檢測時，出現(xiàn)擴增曲線異常的可能原因是什么？①軟件參數(shù)設置不當可能引起標曲參數(shù)或檢測結果異常。如擴增曲線信號蕞早出現(xiàn)在14個循環(huán)左右，基線卻設置為3-15，導致儀器將14個循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號默認為基線部分，出現(xiàn)結果異常。建議將BaselineEnd設置為擴增信號出現(xiàn)的前一個循環(huán)，或由軟件自動設置。②擴增曲線飄起：該現(xiàn)象通常出現(xiàn)于高濃度模板情況下，擴增曲線Ct值在10以內的樣品。針對此類樣品檢測，設置標曲時建議盡量控制標曲蕞高濃度Ct值控制在10以上。檢測樣品時建議對樣品進行稀釋后再測試。上海病毒檢測服務