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廣州qPCR法病毒檢測常見問題

來源: 發(fā)布時間:2024-01-25

南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL復(fù)制型慢病毒/RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測試劑盒的特點:①檢測試劑盒采用qRT-PCR原理,操作便捷,2-3小時可出結(jié)果。②試劑盒檢測體系經(jīng)過精心研發(fā),可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測反應(yīng)中產(chǎn)生擴增,可以蕞大程度的減少檢測過程中污染情況的發(fā)生。③RCL和RCR病毒檢測方法成熟,試劑盒性能穩(wěn)定,檢測靈敏度高,可以快速準確的獲得供試品中靶向基因的含量,幫助研究者進行分析。歡迎聯(lián)系!南京正揚有復(fù)制型慢病毒檢測試劑盒性能如何?廣州qPCR法病毒檢測常見問題

病毒(lentivirus)屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒家族,為人熟知的慢病毒是人免疫缺陷病毒(HIV),來源于慢病毒的復(fù)制缺陷病毒載體已成功用于介導(dǎo)目的基因在靶向細胞的轉(zhuǎn)移和表達,且能夠?qū)⑼庠椿?span style="color:#f5c81c;">有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達。目前基因治  療產(chǎn)品所用慢病毒載體均是非復(fù)制型的,但在病毒包裝過程中,可能會由于同源或非同源重組等機制產(chǎn)生復(fù)制型慢病毒(RCL)。出于安全、有效、質(zhì)量可控的考慮,應(yīng)當進行復(fù)制能力慢病毒檢測,以避免在人體內(nèi)無控地自我復(fù)制,造成傷害,防止發(fā)生臨床安全性隱患事件。深圳重組腺相關(guān)病毒檢測品牌為什么要做復(fù)制型病毒檢測?

用qPCR法進行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測時,出現(xiàn)擴增曲線異常的可能原因是什么?①軟件參數(shù)設(shè)置不當可能引起標曲參數(shù)或檢測結(jié)果異常。如擴增曲線信號早出現(xiàn)在14個循環(huán)左右,基線卻設(shè)置為3-15,導(dǎo)致儀器將14個循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號默認為基線部分,出現(xiàn)結(jié)果異常。建議將BaselineEnd設(shè)置為擴增信號出現(xiàn)的前一個循環(huán),或由軟件自動設(shè)置。②擴增曲線飄起:該現(xiàn)象通常出現(xiàn)于高濃度模板情況下,擴增曲線Ct值在10以內(nèi)的樣品。針對此類樣品檢測,設(shè)置標曲時建議盡量控制標曲蕞濃度Ct值控制在10以上。檢測樣品時建議對樣品進行稀釋后再測試。

《CAR-T細胞治  療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》一文提到:目前RCR/RCL病毒檢測方法主要有指示細胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/q-PCR法(通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng))和轉(zhuǎn)錄酶活性測定法(PERT)等。其中,利用指示細胞培養(yǎng)法對生產(chǎn)過程中的病毒(上清液、病毒生產(chǎn)終末期細胞)存在的RCL進行培養(yǎng)擴增,并在培養(yǎng)終點進行重復(fù)檢測是FDA推薦的RCL檢測方法。

《CAR-T細胞治  療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》一文提到:目前RCR/RCL病毒檢測方法主要有指示細胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/q-PCR法(通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng))和轉(zhuǎn)錄酶活性測定法(PERT)等。其中,利用指示細胞培養(yǎng)法對生產(chǎn)過程中的病毒(上清液、病毒生產(chǎn)終末期細胞)存在的RCL進行培養(yǎng)擴增,并在培養(yǎng)終點進行重復(fù)檢測是FDA推薦的RCL檢測方法。 重組腺相關(guān)病毒檢測。

用qPCR法進行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測時,出現(xiàn)擴增效率超出標準要求(低于83.3%或高于110%)的原因有哪些?①設(shè)計的引物探針不適用:重新分析靶標序列進行設(shè)計。②標曲濃度設(shè)定太高,超出標曲線性范圍:對范圍進行驗證,選取合適標曲范圍。③人員操作問題,如稀釋錯誤、制備過程震蕩時間過長等:人員上崗前應(yīng)接受多培訓(xùn)并做到熟練操作,考核合格后方可上崗。④移液器未校準或品質(zhì)問題導(dǎo)致量取不準:定期對移液器進行校準并選擇好品質(zhì)移液器。復(fù)制型慢病毒檢測方法有哪些?寧波復(fù)制型慢病毒檢測操作流程

復(fù)制型病毒檢測試劑盒方法有哪些?廣州qPCR法病毒檢測常見問題

qPCR法rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測產(chǎn)品的特點:①檢測靈敏度:qPCR法可以達到非常低的檢測靈敏度,這種高靈敏度可以有效地避免rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒對患者的潛在風險。②特異性:qPCR法的特異性非常高,通過選擇性擴增和特異性引物的設(shè)計,可以排除其他污染源對結(jié)果的干擾。③標準曲線:為了準確定量rcAAV的拷貝數(shù),需要建立標準曲線。標準曲線是通過已知濃度的rcAAV標準品制備的,通過測定PCR產(chǎn)物的閾值周期數(shù)(Ct值),與已知濃度的rcAAV標準品的對應(yīng)關(guān)系,建立起濃度和Ct值之間的線性關(guān)系。廣州qPCR法病毒檢測常見問題