RCL復(fù)制型慢病毒檢測(cè)：鑒于RCL的潛在威脅，從慢病毒載體生產(chǎn)工藝的各個(gè)環(huán)節(jié)：主細(xì)胞庫(kù)(MCB)、工作細(xì)胞庫(kù)(WCB)、終末端細(xì)胞(EOPC)、慢病毒收獲液(UPB)、轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞甚至CAR-T治  療病人的臨床樣本都需要進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)來(lái)核實(shí)是否存在RCL，從而可以大限度地避免病人因CAR-T治   療發(fā)生二次腫   瘤。復(fù)制型慢病毒RCL的指示細(xì)胞培養(yǎng)法檢測(cè)需28天，耗時(shí)較長(zhǎng)；而基于VSV-G序列的Q-PCR方法和基于gag序列的PCR方法具有檢測(cè)時(shí)間短、靈敏度高、可重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。目前，許多CAR-T申報(bào)企業(yè)采用Q-PCR/PCR方法直接測(cè)定終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，作為快速放行方法。為什么要做重組腺相關(guān)病毒檢測(cè)？南京病毒檢測(cè)操作流程

美國(guó)FDA2020年發(fā)布的關(guān)于RCR/RCL病毒檢測(cè)指南提出：對(duì)于RCR/RCL的檢測(cè)包含指示細(xì)胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測(cè)定)、PCR/Q-PCR法（通過(guò)psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）、PERT法（產(chǎn)物增強(qiáng)性逆轉(zhuǎn)錄檢測(cè)法）共4種檢測(cè)方法。其中，指示細(xì)胞培養(yǎng)法和Q-PCR法較常用，但各國(guó)監(jiān)管機(jī)構(gòu)推薦并且可以接受的方法還是以指示細(xì)胞培養(yǎng)法為準(zhǔn)。由于細(xì)胞產(chǎn)品一般要新鮮輸注或快速凍存的特殊性，可使用Q-PCR法先進(jìn)行質(zhì)控放行，但指示細(xì)胞培養(yǎng)法應(yīng)同時(shí)進(jìn)行確認(rèn)。深圳復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)復(fù)制型慢病毒檢測(cè)適用性樣品有哪些？

qPCR法RCL/RCR病毒檢測(cè)：目前許多CAR-T企業(yè)采用Q-PCR方法直接測(cè)定CAR-T終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細(xì)胞種產(chǎn)品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細(xì)胞培養(yǎng)法的RCL/RCR檢測(cè)方法周期較長(zhǎng)，建議在細(xì)胞產(chǎn)品制備過(guò)程中進(jìn)行多面控制(如對(duì)慢病毒載體及生產(chǎn)終末細(xì)胞采用基于細(xì)胞培養(yǎng)方法測(cè)定RCL/RCR，以確保生產(chǎn)工藝過(guò)程中不存在RCL的風(fēng)險(xiǎn))，細(xì)胞終產(chǎn)品階段可采用qPCR檢測(cè)法快速放行。qPCR法RCL/RCR病毒檢測(cè)：目前許多CAR-T企業(yè)采用Q-PCR方法直接測(cè)定CAR-T終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細(xì)胞種產(chǎn)品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細(xì)胞培養(yǎng)法的RCL/RCR檢測(cè)方法周期較長(zhǎng)，建議在細(xì)胞產(chǎn)品制備過(guò)程中進(jìn)行多面控制(如對(duì)慢病毒載體及生產(chǎn)終末細(xì)胞采用基于細(xì)胞培養(yǎng)方法測(cè)定RCL/RCR，以確保生產(chǎn)工藝過(guò)程中不存在RCL的風(fēng)險(xiǎn))，細(xì)胞終產(chǎn)品階段可采用qPCR檢測(cè)法快速放行。。

生物檢測(cè)通常用于篩選載體產(chǎn)品中的RCR，而對(duì)輸注后患者的監(jiān)測(cè)則依賴于分子或血清學(xué)檢測(cè)。分子和血清學(xué)檢測(cè)比生物檢測(cè)更快，消耗的資源更少；然而，它們也很容易給出誤報(bào)。蕞常用的RCR病毒檢測(cè)是擴(kuò)展的S+/L-測(cè)定和標(biāo)記拯救測(cè)定。蕞常見(jiàn)的RCL生物測(cè)定方法是通過(guò)在增殖階段將包裝細(xì)胞中的潛在RCL擴(kuò)增至更高滴度，然后進(jìn)行ELISA或分子測(cè)定。迄今為止，在病毒載體、轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞產(chǎn)物或受體患者中尚未報(bào)告陽(yáng)性RCR/RCL結(jié)果。因此，一些研究人員建議，可能是時(shí)候修改FDA指南中對(duì)RCR/RCL監(jiān)測(cè)的要求。為什么要做復(fù)制型慢病毒檢測(cè)？

病毒作為基因載體已普遍用于基因和細(xì)胞醫(yī)治產(chǎn)品。目前常見(jiàn)的病毒載體包括慢病毒（Lentiviral）、逆轉(zhuǎn)錄病毒（Retrovirus）、腺病毒（Adenovirus）、腺相關(guān)病毒（AAV）等。在生產(chǎn)過(guò)程中，如果被有復(fù)制能力的病毒污染，或載體發(fā)生重組，病毒載體中可能會(huì)混雜有復(fù)制型病毒。復(fù)制型慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒（RCL/RCR）可將病毒基因組整合到細(xì)胞基因組中，存在激   活原ai基因、破壞抑ai基因造成二次中瘤的風(fēng)險(xiǎn)；同時(shí)因其具有復(fù)制性，且用水泡性口炎病毒糖蛋白（VSV-G）替代了env編碼的包膜糖蛋白，提高了病毒的嗜性范圍，增加RCR/RCL帶來(lái)的潛在風(fēng)險(xiǎn)；而如果出現(xiàn)復(fù)制型腺相關(guān)病毒（rcAAV），其則會(huì)在被感   染的細(xì)胞中表達(dá)cap或rep基因，容易導(dǎo)致意外的免疫反應(yīng)。因此，各國(guó)法規(guī)對(duì)復(fù)制性   病毒檢測(cè)都提出了明確要求。南京正揚(yáng)有復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)試劑盒嗎？合肥RT-PCR法病毒檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題

如何用qPCR法做復(fù)制型慢性毒檢測(cè)？南京病毒檢測(cè)操作流程

根據(jù)FDA2006年發(fā)布的關(guān)于RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)的指南和2018年新更新的檢測(cè)指南征求意見(jiàn)稿，目前RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒／RCL復(fù)制型慢病毒檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)是共培養(yǎng)法，即將測(cè)試樣品(病毒載體上清液、生產(chǎn)終末細(xì)胞、體外轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞等)與允許細(xì)胞系進(jìn)行共培養(yǎng)，至少5次傳代以擴(kuò)增任何潛在的RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒／RCL復(fù)制型慢病毒，然后在指示階段，通過(guò)檢測(cè)特異性核酸、蛋白的方法進(jìn)行測(cè)定，qPCR/RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，是RCR/RCL檢測(cè)的優(yōu)  選方法。南京病毒檢測(cè)操作流程

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