外泌體的提取主要包括以下幾種方式:一是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不普遍。二是微流控分離法,該方法通過(guò)負(fù)壓及震蕩等機(jī)械原理分離外泌體,產(chǎn)量純度均具有較大幅度提高,但需要特定設(shè)備配合。外泌體分離方法之納米粒徑分析法:確定性橫向位移依賴于顆粒流動(dòng)路徑的變化,而顆粒流動(dòng)路徑取決于顆粒尺寸。這種方法雖然比較簡(jiǎn)單,但是需要使用掃描電鏡技術(shù)、動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)、納米粒子跟蹤分析技術(shù)、單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)技術(shù)等。對(duì)于外泌體大小、形態(tài)、外泌體的濃度、zeta電位等分析也可以使用粒度分析儀。外泌體可以通過(guò)非典型途徑進(jìn)行排毒,參與細(xì)胞解掉毒和化學(xué)治著的作用。福州血漿外泌體供貨商
當(dāng)外泌體在1983年頭次被發(fā)現(xiàn)后,其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對(duì)其生物來(lái)源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細(xì)胞類型,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、疙瘩侵襲等方方面面。有研究表明疙瘩來(lái)源的外泌體參與到疙瘩細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了疙瘩的生長(zhǎng)與侵襲。肺泡外泌體分離多少錢外泌體在疙瘩微環(huán)境中的參與,反映了其具有的高度的異質(zhì)性和復(fù)雜性。
分離外泌體的方法之微流控分離:基于微流體的外泌體分離可以包括用于外泌體捕獲的免疫親和方法,納米多孔膜篩分方法或微柱上的納米線用于外泌體捕獲。所有三個(gè)系統(tǒng)都需要具有粘彈性分析和電操作的芯片才能進(jìn)行外泌體分離過(guò)程。外泌體的特異性很高,采用基于微流控芯片的免疫親和捕獲方法。尺寸范圍在40-100nm之間的外泌體被這種微流體芯片特異性地捕獲,在外泌體分離和定量方面的益處。篩分方法可用于通過(guò)壓力或通過(guò)電泳從全血中過(guò)濾外泌體,壓力的利用使分離時(shí)間更短,電場(chǎng)導(dǎo)致高外泌體純度。特異性、可重復(fù)性、低分離時(shí)間和更低的分離成本是基于微流體的外泌體分離的一些優(yōu)點(diǎn)。
外泌體的分離方法:目前,有許多可用的外泌體分離方法。比較傳統(tǒng)的外泌體分離方法是超速離心,許多人將其視為金標(biāo)準(zhǔn)。其他技術(shù)主要基于大小排阻或抗體介導(dǎo)的標(biāo)記外泌體分離。每種分離方法在純度、數(shù)量、效率和通量方面都不同。超速離心法分離法的缺點(diǎn)是外泌體結(jié)構(gòu)容易發(fā)生改變,造成外泌體的結(jié)構(gòu)不一致性甚至?xí)?dǎo)致外泌體受損。超濾法:超濾法使用的是微孔過(guò)濾器;因此,較大的顆粒將從濾液中排除。它可以與離心結(jié)合使用,通過(guò)初步去除細(xì)胞碎片等大顆粒來(lái)加速外泌體的純化。不過(guò)使用此方法需要防止孔隙堵,不適合大規(guī)模的樣本處理。外泌體與細(xì)胞死亡形式相關(guān),可以參與凋亡和壞死細(xì)胞的清理和處理過(guò)程。
在生物流體中發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞外囊泡包括來(lái)自內(nèi)體,多泡體的細(xì)胞外泌體(30nm至150nm)和來(lái)自質(zhì)膜的微泡(150nm至1000nm)。目前已知有多種從生物體液中分離外泌體的方法除了使用高速離心機(jī)的離心分離法以外,還有色譜法、超濾過(guò)濾法、基于聚合物的沉淀和免疫分離法等。#外泌體干細(xì)胞#這些細(xì)胞外泌體分離方法提取的外泌體要警惕非外泌體顆粒污染,如凋亡小體、凋亡小囊泡、外泌體和脂蛋白,均會(huì)對(duì)獲得的外泌體生物活性產(chǎn)生影響。另外,分離方法也會(huì)影響細(xì)胞外泌體的純度和產(chǎn)量。如果要從培養(yǎng)基中分離外泌體,就要使用無(wú)血清培養(yǎng)基或無(wú)外泌體胎牛血清。外泌體的定量檢測(cè)和分析可作為疾病診斷和治著中的新型指標(biāo)。福州血漿外泌體供貨商
外泌體的分離純化有助于其后續(xù)研究,例如外泌體功能的解析等。福州血漿外泌體供貨商
分離外泌體的方法之超濾:樣品通過(guò)0.2μm聚醚砜(PES)膜過(guò)濾,較大的顆粒物質(zhì)(如細(xì)胞碎片和凋亡體)被滯留出來(lái)。然后,包括外泌體在內(nèi)的半處理濾液樣品通過(guò)TFF系統(tǒng)通過(guò)500kDa截止濾芯進(jìn)行超濾過(guò)程,進(jìn)料流速為120mL/min,跨膜壓力<3.5psi跨膜壓力>10:1,外泌體太大而無(wú)法通過(guò)毛孔并保持保留。相反,包括游離蛋白在內(nèi)的小分子通過(guò)中空纖維孔并作為滲透物洗脫并較終從過(guò)程中丟棄。為了獲得高質(zhì)量的外泌體分離和純化,通過(guò)TFF連續(xù)重新濃縮截留物樣品,并去除小于500kDa的污染物。較后,將純化的外泌體重懸并儲(chǔ)存在-80°C的聚對(duì)苯二甲酸乙二醇(PETG)瓶中的0.1M蔗糖中,并用于所需的分析。通常,通過(guò)結(jié)合超濾加超速離心或離心加超濾等不同分離方法可以成功分離外泌體,使用較低孔徑的膜過(guò)濾和超速離心可提供純外泌體。福州血漿外泌體供貨商