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合肥血漿外泌體分離報價

來源: 發(fā)布時間:2023-09-01

外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法:基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對分離的外泌體產(chǎn)生溫和影響而且可以產(chǎn)生中性的pH值。由此,出現(xiàn)了幾種常見的外泌體試劑盒:比如:SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明,使用ExoQuick方法可以快速執(zhí)行,無需額外設(shè)備,只需用高速離心機進行超速離心可以獲得高產(chǎn)量的外泌體。但是此方法的缺點是:非外泌體材料對外泌體分離物的污染仍然是基于聚合物的分離方法的一個問題。此外,分離物中的聚合物可能會干擾下游分析。外泌體受到多種因素的調(diào)控,例如細胞膜電位、氧化應激和信號轉(zhuǎn)導途徑等。合肥血漿外泌體分離報價

外泌體分離方法之密度梯度離心法:這種方法將超速離心機的超速離心與蔗糖密度梯度相結(jié)合。具體地說,密度梯度離心用于將外泌體與非囊泡顆粒(例如蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)/RNA聚集體)分離。因此,該方法將囊泡與不同密度的顆粒分離。足夠的離心時間比較重要,否則如果外泌體部分具有相似的密度,則仍可能在外泌體部分中發(fā)現(xiàn)污染顆粒。該結(jié)構(gòu)不會讓大于1μm的細胞和其他顆粒進入布線區(qū)域。一些較小的顆粒和細胞碎片可以進入微柱區(qū)域,但被納米纖毛排除,形成直徑為30-200nm的孔。纖毛結(jié)構(gòu)選擇性地捕獲外泌體和小細胞外囊泡。合肥血漿外泌體分離報價蛋白質(zhì)分離方法可以用于外泌體的分離和純化。

外泌體可以傳遞生物分子,例如蛋白質(zhì)、DNA、mRNA等,影響接收器細胞的表現(xiàn)型和生理活性。外泌體可通過特定的組裝和功能修飾,提高其對宿主細胞的選擇性靶向性。核酸是在外泌體中發(fā)現(xiàn)的另一組主要顆粒,即DNA和RNA,它們可以在細胞中發(fā)揮功能作用。在源自小鼠和人類肥大細胞的外泌體中發(fā)現(xiàn)了約1300種mRNA、121種miRNA和>100種小RNA,但未檢測到DNA和rRNA。在外泌體中發(fā)現(xiàn)的其他miRNA是lin-4和let-7,以及母乳中的miR-181a和miR-155。小鼠外泌體對人類細胞的刺激可以導致人類細胞中小鼠蛋白質(zhì)的合成。此外,外泌體和受體細胞的mRNA譜不同,表明mRNA被主動分選為MVB。

人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合,進而靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。二是在細胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合,從而打開細胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。外泌體富集、分離和檢測是當前外泌體研究的熱點之一。

外泌體的表征方法之非光學方法:非光學方法主要包括掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡(TEM)、冷凍電子顯微鏡(Cryo-EM)、原子力顯微鏡(AFM)、免疫檢測方法(ELISA)、傅立葉變換紅外光譜(FTIR)、可調(diào)諧電阻脈沖傳感(TRPS)和單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜結(jié)構(gòu)和形態(tài)測定,而ELISA檢測提供各種結(jié)構(gòu)顆粒(主要是蛋白質(zhì)和受體)的檢測和量化,例如,用于外泌體形態(tài)的確認。單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)也用于外泌體定量,但也可用于檢測特定標記物和確定外泌體亞群。現(xiàn)有的外泌體分離方法可能存在樣品丟失和樣品污染的問題。合肥血漿外泌體分離報價

外泌體分離和分析的標準化和規(guī)范化將有助于外泌體研究領(lǐng)域的進一步發(fā)展。合肥血漿外泌體分離報價

外泌體分離方法之超速離心法:超速離心基于顆粒的大?。ㄖ亓浚┘捌湓陔x心力(100,000–110,000×g)下的離心沉降。至于去除的細胞碎片和不需要的顆??梢酝ㄟ^稱為差速離心的幾步慢速離心來獲得。外泌體的純化可以采用蔗糖梯度密度離心純化法:即:在蔗糖梯度(1.13–1.19g/mL)或緩沖液中進行,以實現(xiàn)更高的富集、產(chǎn)量和純度增加。外泌體分離方法之微流控分離法:微流控分離法主要是在微芯片上進行的,這里我們需要提及的是,微流控分離法法可用于外泌體分離(免疫結(jié)合和磁結(jié)合、過濾),效率相對較高(約90%)。合肥血漿外泌體分離報價

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