外泌體的構(gòu)成：除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9）、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細胞）。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶（烯醇化酶1,醛縮酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB,LDH,親環(huán)素A,FASN,MDH1和CNP）、核糖體蛋白（RPS3）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子（黑色素瘤分化相關(guān)因子,ARF1,CDC42,人類紅細胞膜整合蛋白,SLC9A3R1）、粘附因子（MFGE8、整合素）、細胞骨架蛋白以及泛素等。外泌體介導(dǎo)的RNA轉(zhuǎn)移對基因表達水平和遺傳數(shù)據(jù)傳遞具有重要的調(diào)節(jié)作用。上海外泌體分離芯片檢測

外泌體的表征方法之光學方法：目前，光學方法是外泌體表征的主要方法，即動態(tài)光散射(DLS)、多角度光散射(MALS)和納米粒子跟蹤分析(NTA)。這些方法允許對尺寸（DLS0.5–200nm；MALS10–500nm；NTA10–1000nm）、尺寸分布和濃度進行高分辨率測量。DLS和MALS的結(jié)合增加了測量范圍(0.5–500nm)和精度。光學方法比較受歡迎的，但缺點是靈敏度低、試劑消耗高以及需要昂貴的設(shè)備。在使用納米粒子跟蹤分析NTA方法過程中，熒光染料的加入也提高了分辨率，并允許通過使用熒光標記來表征表面免疫表型。從而確定標記物存在。上海外泌體分離芯片檢測分離樣品前的處理對較終外泌體分離的效果有較大影響。

外泌體的物理表征方法：常用的外泌體物理表征方法是基于顯微鏡的方法，例如透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、低溫電子顯微鏡和原子力顯微鏡；動態(tài)光散射；納米粒子跟蹤分析；可調(diào)電阻脈沖傳感；和單個EV分析等。用于分析外泌體濃度、定量和概況的分子生物方法主要包括：實時定量PCR、數(shù)字PCR技術(shù)（基于芯片的dPCR、液滴數(shù)字PCR、ddPCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡、全基因組測序（next-generationsequencing）、exome-targetedsequencing（下一代測序）、微陣列圖譜技術(shù)和ELISA技術(shù)等。

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：miRNA是一類主要的小分子、單鏈、非編碼RNA分子，其成熟形式的長度在20到22個核苷酸(NT)之間，在幾乎所有生物途徑中發(fā)揮重要作用，包括細胞生長、增殖、分化、免疫反應(yīng)，細胞凋亡，代謝和疙瘩發(fā)生。外泌體在體液中的主要作用是可以保護miRNA，防止其生物分子在非生理條件下（多次凍融循環(huán)、長期儲存和極端pH）降解。據(jù)報道，外泌體來源的miRNA在-20°C下可保持穩(wěn)定長達5年，并且對凍融循環(huán)具有抵抗力.這也使外泌體成為病癥和其他疾病的潛在生物標志物。miRNA與包括病癥在內(nèi)的許多疾病的發(fā)病機制有關(guān)，并且還被證明被遠端或附近的受體細胞吸收作為外泌體中的貨物，作為細胞間通訊的一種方法，可能會影響發(fā)病機制。所以，外泌體可以被看作是miRNA轉(zhuǎn)移至目標受體細胞的載體。外泌體來源于細胞內(nèi)各種類型的囊泡，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和細胞膜等。

人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學活性。外泌體介導(dǎo)的細胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合，進而靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。二是在細胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合，從而打開細胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。外泌體可以傳遞生物分子，例如蛋白質(zhì)、DNA、mRNA等，影響接收器細胞的表現(xiàn)型和生理活性。深圳血液外泌體分離價格

外泌體分離器材的選擇也對分離結(jié)果有一定的影響。上海外泌體分離芯片檢測

在生物流體中發(fā)現(xiàn)的細胞外囊泡包括來自內(nèi)體，多泡體的細胞外泌體（30nm至150nm）和來自質(zhì)膜的微泡（150nm至1000nm）。目前已知有多種從生物體液中分離外泌體的方法除了使用高速離心機的離心分離法以外，還有色譜法、超濾過濾法、基于聚合物的沉淀和免疫分離法等。#外泌體干細胞#這些細胞外泌體分離方法提取的外泌體要警惕非外泌體顆粒污染，如凋亡小體、凋亡小囊泡、外泌體和脂蛋白，均會對獲得的外泌體生物活性產(chǎn)生影響。另外，分離方法也會影響細胞外泌體的純度和產(chǎn)量。如果要從培養(yǎng)基中分離外泌體，就要使用無血清培養(yǎng)基或無外泌體胎牛血清。上海外泌體分離芯片檢測

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