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沈陽(yáng)核酸DNA提取

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-06-08

DNA提取鑒定方法:分光光度法:在260nm和280nm處測(cè)定DNA溶液的光吸收,A260與A280之比應(yīng)在1.75-1.80之間。低于此值表明制備物中殘留蛋白質(zhì)成分較高或含有酚,高于此值表明有RNA的殘留。凝膠電泳分析:影響瓊脂糖凝膠電泳DNA遷移率的因素:①DNA分子大小,DNA分子越大遷移速度越慢。②遷移率與瓊脂糖濃度成反比。③DNA構(gòu)象:a.相同分子量的超螺旋環(huán)狀(Ⅰ型),切口環(huán)狀(Ⅱ型),線狀(Ⅲ型)DNA,以不同速率通過(guò)凝膠。b.一般情況下,遷移率Ⅰ型>Ⅲ型>Ⅱ型。④電壓:遷移率與所加電壓成正比,但是電壓過(guò)大有效分離范圍減小。⑤電場(chǎng)方向:?jiǎn)我环较蛩俾示龋淖兎较?,極大分子DNA遷移更慢。通過(guò)脈沖電場(chǎng)凝膠電泳分離極大DNA。RNA提取需要使用酶或化學(xué)試劑來(lái)裂解細(xì)胞膜和核膜。沈陽(yáng)核酸DNA提取

磁珠法DNA提?。捍胖榉ǖ脑硎窃诖胖楸砻嫘揎椨袑?duì)核酸有吸附作用的特定活性官能基團(tuán),通過(guò)不同的裂解液結(jié)合液洗滌液在特定的條件下能夠與目的物質(zhì)進(jìn)行特異性結(jié)合,同時(shí)利用磁珠自身的磁性,在外磁場(chǎng)的作用下可以方便的實(shí)現(xiàn)定向移動(dòng)與富集,從而達(dá)到核酸與雜質(zhì)分離的目的,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的分離純化,獲得純化核酸。磁珠法是納米科技與生物技術(shù)的完美結(jié)合,具有其他DNA提取方法無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì),主要體現(xiàn)在:操作簡(jiǎn)單、用時(shí)短,整個(gè)提取流程只有裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫四步短時(shí)間內(nèi)即可完成。青島快速DNA提取制造商DNA提取的樣品準(zhǔn)備之生物組織:較好新鮮組織,若不能馬上提取,應(yīng)貯存-70℃或液氮。

離心柱法DNA提取:離心柱法主要原理是將對(duì)核酸有吸附作用的官能基團(tuán)固定在離心柱模上,通過(guò)加入不同的裂解試劑、洗滌試劑并反復(fù)離心,以達(dá)到核酸與雜質(zhì)分離的目的,獲得純化的核酸。離心柱法DNA提取它的優(yōu)點(diǎn)是比傳統(tǒng)的酚氯法提取的純度高,有利于RNA保護(hù),而且能進(jìn)行微量操作,以其低廉的價(jià)格和相對(duì)便捷的操作,漸逐取代了傳統(tǒng)DNA提取方法,被高??蒲兴仁袌?chǎng)普遍接受。RNA沉淀?xiàng)l件不合適:使用異丙醇沉淀RNA時(shí),加入的異丙醇與提取液的比例偏高。溶液的pH值偏小,都容易使DNA形成沉淀。

骨組織RNA提取之其它骨組織破碎方法:立刻將混合物(每次小于720μl,多可以分兩次加入)加入一個(gè)吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm離心2分鐘,棄掉廢液。確保離心后液體全部濾過(guò)去,膜上沒(méi)有殘留,如有必要,可以加大離心力和離心時(shí)間。加700μl去蛋白液RW1,室溫放置1分鐘,13,000rpm離心30秒,棄掉廢液。加入500μl漂洗液RW(請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!),13,000rpm離心30秒,棄掉廢液。加入500μl漂洗液RW,重復(fù)一遍。將吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm離心2分鐘,盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。DNA提取的目的是獲得高質(zhì)量的DNA樣本,以進(jìn)行后續(xù)的分析和研究。

核酸提取,是分子生物學(xué)中較常見(jiàn)的基本操作,一般分為DNA提取與RNA提取,提取核酸的質(zhì)量直接影響后續(xù)的檢測(cè)工作,暫對(duì)常見(jiàn)的問(wèn)題進(jìn)行了一個(gè)總結(jié)。DNA提?。?.A260/280比值較低?或者A260/280比值較高?用水作為洗脫液比較偏低,或者蛋白質(zhì)殘留,但如果操作過(guò)程中使用了苯酚,則更可能是苯酚殘留。而比較高可能是大量RNA殘留,沒(méi)有使用RNaseA,或RNaseA活性下降。A260值提示的含量與電泳檢測(cè)時(shí)提示的含量有可見(jiàn)的誤差則為苯酚殘留。DNA提取的成功與否對(duì)于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果有著重要的影響。沈陽(yáng)核酸DNA提取

RNA提取需要使用高質(zhì)量的RNA以獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。沈陽(yáng)核酸DNA提取

骨組織RNA提取之其它骨組織破碎方法:確保離心后液體全部濾過(guò)去,膜上沒(méi)有殘留,如有必要,可以加大離心力和離心時(shí)間。將基因組DNA清理柱子放在一個(gè)干凈2ml離心管內(nèi)(不用RNAsefree或者DEPC處理,一般干凈的新離心管即可。也可使用RNA吸附柱配套的新的干凈收集管),在基因組清理柱內(nèi)加500μl裂解液RLTPlus,13,000rpm離心30秒,收集濾液(RNA在濾液中),用微量移液器較精確估計(jì)濾過(guò)液體積(通常為450-500μl左右,濾過(guò)時(shí)候損失體積應(yīng)該減去),加入0.5倍體積的無(wú)水乙醇,此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀,但是不影響提取過(guò)程,立即吹打混勻,不要離心。沈陽(yáng)核酸DNA提取

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