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外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用:miRNA的靈敏生物標志物測定法主要用于檢測早期階段(0-1)疙瘩的存在。除了基于組織活檢的當前研究外,循環(huán)miRNA的研究是生物標志物研究中一個新的擴展領(lǐng)域,因為它們具有所有特征(miRNA分析、診斷、預(yù)后、治著反應(yīng)和預(yù)測性生物標志物),可在液體活檢(生物體液)中檢測到,并且不需要對病人進行健康和疙瘩活檢。血液樣本等體液分析檢測使醫(yī)生和研究人員能夠及早了解病癥的發(fā)展狀況。miRNA被稱為基因表達的基本調(diào)節(jié)因子,尤其是在病癥中,并且在疙瘩發(fā)生、轉(zhuǎn)移和對各種療法的耐藥性中發(fā)揮重要作用。據(jù)報道,哺乳動物細胞每個細胞含有大約100,000個內(nèi)源性miRNA分子。據(jù)估計,單個外泌體較多可攜帶約500個miRNA拷貝。正常人血液中的外泌體量在病癥患者中約為109個外泌體/ml。外泌體與肺的關(guān)系密切,通過氣道和肺泡微環(huán)境的打開和修飾,參與肺疾病如肺結(jié)核、肺病等的發(fā)生和發(fā)展。深圳外泌體分離生產(chǎn)商
通過對外泌體以及外泌體提取相關(guān)生物試劑的研究發(fā)現(xiàn):外泌體除了蛋白質(zhì),外泌體還含有RNA。外泌體miRNA可用于各種疙瘩的判斷。目前有八種miRNA被確定為卵巢病的標志物。此外,據(jù)報道,肺腺病者的血清和疙瘩樣本中的miRNA會增加。前列腺病的血清中外泌體miRNAmiR-141和miR-375水平會升高。研究表明,外泌體miRNA-21的血清水平升高和miRNA-1246在ESCC群體中凸現(xiàn)。有趣的是,外泌體miRNA可能是腎纖維化和心血管癥的潛在判斷標志物。對于進行型退行型疾病,在阿爾茨海默者的生物體液中發(fā)現(xiàn)了幾種miRNA,如:miR-9、miR-107、miRNA-128、miRNA134和miRNA-137miRNA124的高表達水平。佛山上清外泌體分離多少錢外泌體在心血管系統(tǒng)中扮演著重要的調(diào)節(jié)作用,與各種疾病如心肌梗死、心衰等相關(guān)聯(lián)。
外泌體的構(gòu)成:外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年,Valadi等發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細胞分泌的exosome可以被人的肥大細胞捕獲,并且其攜帶的mRNA成分可以進入細胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì),不只是mRNA,exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性,在進入靶細胞后可以靶向調(diào)節(jié)細胞中mRNA的水平。這一發(fā)現(xiàn)使得研究人員對exosome的研究熱情激增,截止已經(jīng)通過286項研究發(fā)現(xiàn)了41860種蛋白質(zhì)、2838種microRNA、3408種mRNA。一類外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內(nèi)體中,RAB7和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內(nèi)體?,F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。
分離外泌體的方法之免疫親和相互作用:免疫親和法是利用外泌體表面蛋白(抗原)與其靶抗體或分離配體分子之間的免疫親和相互作用原理分離純外泌體的理想方法。它有助于根據(jù)其表面標志物分離特定類型的外泌體。基于微孔板的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是免疫親和分離試劑盒的一個例子,用于根據(jù)外泌體表面標志物分離外泌體。Tetraspanin蛋白是這種分離方法的決定因素??笴D9、抗CD63和抗CD81是免疫親和外泌體分離中使用的抗體的常見示例。免疫親和法可用于從結(jié)腸病細胞中分離外泌體,其效率高于超速離心和密度梯度分離。另外還有一種外泌體分離方法,該方法采用抗體包被的基于磁性顆粒的技術(shù)來分離外泌體。外泌體受到多種因素的調(diào)控,例如細胞膜電位、氧化應(yīng)激和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等。
外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用:外泌體保護miRNA免于降解,使它們比游離miRNA更穩(wěn)定,并能被特定受體細胞有效整合。因此,在外泌體攜帶的貨物中,miRNA可以提供有關(guān)它們來源的細胞類型、靶標和細胞狀態(tài)的身份信息。越來越多的證據(jù)表明,疙瘩細胞來源的外泌體已成為通過傳遞病miRNA促進疙瘩細胞增殖、侵襲、血管生成、遠處轉(zhuǎn)移和疙瘩微環(huán)境重塑的主要候選者。血管生成對于惡性疙瘩的生長和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要,因為新血管可以提供額外的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì),還可以清理廢物。比如:病細胞釋放外泌體exo-miR-21、exo-miR-23;外-miR-29;exo-miR-103和exo-miR-210可以促進增殖、血管生成和疙瘩轉(zhuǎn)移。外泌體可以作為一種新型的藥物輸送系統(tǒng),利用其高度選擇性的靶向性,有效地提高藥物的生物利用度。蘇州組織提取外泌體蛋白檢測
外泌體與生物體的免疫應(yīng)答密切相關(guān),通過它們攜帶的抗原和免疫調(diào)節(jié)分子對免疫系統(tǒng)起到調(diào)節(jié)作用。深圳外泌體分離生產(chǎn)商
外泌體的表征方法:根據(jù)藥物遞送系統(tǒng)(DDS)表征外泌體結(jié)構(gòu)至關(guān)重要,因為它決定了DDS的特性,例如細胞或組織親和力、應(yīng)激反應(yīng)、吸收途徑和藥物釋放。2014年和2018年國際細胞外囊泡學會(MISEV2018)提出了外泌體(包括研究和外泌體制備)應(yīng)滿足的基本要求指南。在開發(fā)基于外泌體的DDS時,必須考慮數(shù)量、大小、形態(tài)、膜組成和蛋白質(zhì)(包括受體)等參數(shù)。這些參數(shù)表征所用的技術(shù)主要為光學、非光學和微流體技術(shù)。外泌體的表征方法之非光學方法:FTIR光譜和衰減全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌體質(zhì)量量化和脂質(zhì)和蛋白質(zhì)含量的總體估計。使用TRPS,可以同時測量大小、濃度和zeta電位。由于掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡的成本較高,近些年來,一種新型的納米粒度分析儀器在外泌體研究領(lǐng)域迅速發(fā)展,比如:粒度分析儀可以不只可以進行單顆粒檢測,顆粒粒徑檢測還可以檢測細胞外泌體的濃度、zeta電位、形態(tài)等進行多維度檢測。深圳外泌體分離生產(chǎn)商
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