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在現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)已成為不可或缺的工具,廣泛應(yīng)用于基因擴(kuò)增、突變檢測、基因表達(dá)分析等多個(gè)領(lǐng)域。而一款PCR Master Mix則是確保實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素之一。Phusion Master Mix (2×) (Without Dye)憑借其性能和獨(dú)特的產(chǎn)品特點(diǎn),為科研工作者提供了高效、可靠的實(shí)驗(yàn)解決方案。一、酶性能Phusion Master Mix的成分是Phusion DNA聚合酶,這是一種具有高保真性的熱穩(wěn)定酶。它能夠以極高的準(zhǔn)確性復(fù)制DNA模板,錯(cuò)誤率極低,為普通Taq酶的1/500,這使得它在擴(kuò)增長片段DNA或?qū)π蛄袦?zhǔn)確性要求極高的實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出色。例如,在進(jìn)行基因克隆或構(gòu)建基因文庫時(shí),Phusion酶能夠確保擴(kuò)增產(chǎn)物的序列與原始模板高度一致,從而提高了后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成功率。二、快速擴(kuò)增能力盡管Phusion酶具有高保真性,但其擴(kuò)增速度并未受到影響。它能夠在短時(shí)間內(nèi)完成長片段DNA的擴(kuò)增,提高了實(shí)驗(yàn)效率。對于長度在5kb以內(nèi)的DNA片段,Phusion Master Mix可以在幾分鐘內(nèi)完成擴(kuò)增,這對于需要快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果的研究人員來說是一個(gè)巨大的優(yōu)勢。例如,在進(jìn)行高通量基因篩查或大規(guī)模樣本分析時(shí),Phusion Master Mix能夠縮短實(shí)驗(yàn)周期,提高工作效率。His-Avi Tag包含了特定肽段,分子量預(yù)測為50.20 kDa,但由于糖基化,其在Tris-Bis PAGE結(jié)果上遷移至55-60 kDa。Recombinant Rat IL-22R alpha 1 Protein,hFc Tag
一、產(chǎn)品特點(diǎn)(一)高靈敏度該qPCR Mix采用了先進(jìn)的熱啟動(dòng)Taq酶技術(shù),通過化學(xué)修飾將酶活性鎖定在低溫條件下,在PCR反應(yīng)的高溫變性階段釋放活性。這一特性有效避免了非特異性擴(kuò)增,顯著提高了反應(yīng)的靈敏度,即使對于低豐度的靶基因,也能實(shí)現(xiàn)檢測。例如,在檢測稀有突變基因時(shí),其高靈敏度能夠確保即使在野生型基因背景中含量極低的突變基因也能被準(zhǔn)確識(shí)別,為病痛早期篩查等研究提供了有力支持。(二)高特異性其獨(dú)特的緩沖體系經(jīng)過優(yōu)化,能夠精確調(diào)控引物與模板的結(jié)合過程。在反應(yīng)過程中,該體系可有效減少引物二聚體的形成,同時(shí)增強(qiáng)引物與目標(biāo)模板的特異性結(jié)合能力。這使得在復(fù)雜的基因組背景下,目標(biāo)基因得以高效擴(kuò)增,從而顯著提高了qPCR反應(yīng)的特異性。在多基因家族成員的區(qū)分檢測中,這種高特異性優(yōu)勢尤為明顯,能夠避免因引物錯(cuò)配導(dǎo)致的非目標(biāo)基因擴(kuò)增,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。Substance P (7-11)Endo H,糖苷內(nèi)切酶 H 具有高度特異性的催化活性,它能夠特異性地水解 N - 連接寡糖鏈中兩個(gè)糖苷鍵。
快速高效的擴(kuò)增能力AdvanceFastPCRMasterMix采用了改良型的高保真DNA聚合酶,能夠在極短時(shí)間內(nèi)完成PCR擴(kuò)增。其延伸速度可達(dá)5秒/kb,甚至在1kb以內(nèi)的片段需1秒即可完成擴(kuò)增。這種高速擴(kuò)增能力縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,提高了科研效率。高保真性與高特異性該產(chǎn)品使用高保真DNA聚合酶,保真性遠(yuǎn)高于普通Taq酶,能夠有效減少擴(kuò)增錯(cuò)誤和非特異性產(chǎn)物。同時(shí),預(yù)混液中添加了特異性保護(hù)劑,即使在反復(fù)凍融后仍能保持穩(wěn)定的活性。即用型預(yù)混液,操作簡便AdvanceFastPCRMasterMix(2×)(WithDye)是即用型的2×預(yù)混合溶液,包含所有PCR反應(yīng)所需成分,如高保真DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化緩沖體系和電泳指示劑。用戶只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增,簡化了實(shí)驗(yàn)步驟,減少了人為誤差。兼容性強(qiáng),適用范圍廣該產(chǎn)品適用于多種類型的DNA模板,包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA和cDNA。此外,其擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端,可直接用于后續(xù)的克隆、測序等應(yīng)用。
Taq DNA聚合酶:分子生物學(xué)的“明星酶”Taq DNA聚合酶是一種從嗜熱菌Thermus aquaticus中分離得到的耐熱性DNA聚合酶,因其獨(dú)特的耐高溫特性和高效的DNA合成能力,成為分子生物學(xué)領(lǐng)域不可或缺的工具。該酶在PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)中發(fā)揮著重要作用,極大地推動(dòng)了基因擴(kuò)增、測序和診斷技術(shù)的發(fā)展。Taq DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性,但缺乏3'→5'外切酶活性,這使得它在DNA合成過程中能夠快速延伸引物,同時(shí)在PCR產(chǎn)物的3'端添加一個(gè)突出的A堿基,便于后續(xù)的克隆操作。此外,Taq酶的耐熱性使其能夠在PCR的高溫變性步驟中保持穩(wěn)定,從而實(shí)現(xiàn)高效的循環(huán)擴(kuò)增。近年來,科學(xué)家們通過對Taq DNA聚合酶的改造和優(yōu)化,開發(fā)出多種突變體,以滿足不同的實(shí)驗(yàn)需求。例如,Klentaq1突變體具有更高的耐熱性和保真性,適用于長片段PCR擴(kuò)增。此外,Taq酶的5'外切酶活性還被用于開發(fā)新型的多重PCR檢測技術(shù),如“MeltArray”技術(shù),實(shí)現(xiàn)了在單次反應(yīng)中檢測多個(gè)靶點(diǎn)。Taq DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用不僅極大地簡化了DNA擴(kuò)增的流程,還為基因診斷、遺傳病檢測和個(gè)性化醫(yī)療等領(lǐng)域提供了強(qiáng)大的技術(shù)支持。Pfu DNA Polymerase與Taq酶的對比:與Taq酶相比,Pfu DNA Polymerase的錯(cuò)誤率更低,適合高精度實(shí)驗(yàn)。
高靈敏度與特異性該產(chǎn)品采用優(yōu)化的SYBRGreenI染料配方,能夠與雙鏈DNA特異性結(jié)合,即使在低拷貝數(shù)的目標(biāo)序列中也能實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測。其優(yōu)化的反應(yīng)體系確保了高效的擴(kuò)增效率,同時(shí)減少了非特異性產(chǎn)物的生成。低ROX參考染料產(chǎn)品中預(yù)混了低濃度的ROX參考染料,適用于多種qPCR儀器平臺(tái),無需額外添加或調(diào)整ROX濃度,簡化了實(shí)驗(yàn)操作流程,同時(shí)保證了熒光信號(hào)的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。UDG防污染系統(tǒng)為了防止qPCR實(shí)驗(yàn)中的氣溶膠污染,該產(chǎn)品引入了dUTP/UDG防污染體系。UDG酶能夠降解含有dUTP的殘留DNA,從而有效避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn),確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性??焖俜磻?yīng)與模板兼容性SYBRGreenqPCRMix(2×,LowROX,UDGPlus)采用了高性能的熱啟動(dòng)TaqDNA聚合酶,能夠在短時(shí)間內(nèi)完成反應(yīng),同時(shí)兼容高GC或高AT含量的DNA模板,展現(xiàn)出優(yōu)異的擴(kuò)增性能。便捷的2×預(yù)混液設(shè)計(jì)該產(chǎn)品為2×濃度的預(yù)混液,包含qPCR所需的所有關(guān)鍵組分,如TaqDNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等,需加入引物和模板即可進(jìn)行反應(yīng),簡化了實(shí)驗(yàn)操作。泛素連接酶E3識(shí)別特定的靶蛋白,并促進(jìn)E2上的泛素轉(zhuǎn)移到靶蛋白的賴氨酸殘基上,形成靶蛋白-泛素復(fù)合物。Recombinant Cynomolgus PD-1/PDCD1 Protein,hFc Tag
Phusion DNA Polymerase是一種高性能的熱穩(wěn)定DNA聚合酶,以其高保真度快速擴(kuò)增和穩(wěn)健反應(yīng)而聞名于科研領(lǐng)域。Recombinant Rat IL-22R alpha 1 Protein,hFc Tag
Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) 是一種來源于嗜冷海洋細(xì)菌的熱敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG/UNG)。該酶能夠特異性地催化水解含有尿嘧啶的DNA鏈中的尿嘧啶堿基,釋放游離尿嘧啶,并在DNA中產(chǎn)生無堿基位點(diǎn)(AP位點(diǎn)),從而防止PCR產(chǎn)物的氣溶膠污染。產(chǎn)品特點(diǎn)與傳統(tǒng)UDG酶相比,熱敏UDG酶在室溫下即可高效發(fā)揮作用,且對溫度極為敏感,可在50℃下10分鐘內(nèi)完全失活。這種特性使其在PCR和RT-PCR反應(yīng)中表現(xiàn)出色,尤其適用于需要快速滅活的場景。此外,該酶對單鏈和雙鏈DNA均具有活性,但對RNA或不含尿嘧啶的DNA無作用。其高純度和低殘留特性使其在高投入量下也不會(huì)對檢測體系產(chǎn)生抑制。應(yīng)用場景去除PCR產(chǎn)物污染:通過降解含尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,防止氣溶膠污染導(dǎo)致的假陽性。RT-qPCR防污染:在RT-qPCR反應(yīng)中,熱敏UDG酶可在逆轉(zhuǎn)錄前去除殘留的PCR產(chǎn)物。單鏈或雙鏈DNA處理:用于去除DNA中的尿嘧啶堿基。在使用過程中,建議將酶液存放在冰盒內(nèi)或冰浴上,使用完畢后立即放回-20℃保存。此外,熱敏UDG酶在RT-qPCR反應(yīng)中表現(xiàn)出良好的兼容性,即使在高投入量下也不會(huì)對反應(yīng)產(chǎn)生抑制。Recombinant Rat IL-22R alpha 1 Protein,hFc Tag