殺毒滅菌方式主要有三種類型：⑴高壓蒸汽滅菌方式，此方法可用于大多數(shù)耐熱培養(yǎng)基。⑵煮沸滅菌法方式：此方法可用于含有不耐高溫物質(zhì)的培養(yǎng)基。⑶過(guò)濾除菌方式：過(guò)濾除菌，采用無(wú)菌技術(shù)定量添加培養(yǎng)基。血液和可以用無(wú)菌技術(shù)抽取并加入冷卻至約五十度的培養(yǎng)基中。當(dāng)培養(yǎng)基中含有不耐熱物質(zhì)時(shí)可以使用此方法。培養(yǎng)基倒入平板：將滅菌溶化的培養(yǎng)基冷卻至五十度后，倒入無(wú)菌干燥的培養(yǎng)皿中。微生物培養(yǎng)基制備的溫度不能太高，否則培養(yǎng)皿內(nèi)蓋容易形成過(guò)多的冷凝水。全自動(dòng)培養(yǎng)基制備儀主要特點(diǎn)：具有快速升溫和迅速冷卻功能!山東自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器

在制備培養(yǎng)基時(shí)，通常要考慮以下因素：1.緩沖能力碳算鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低、對(duì)培養(yǎng)物有營(yíng)養(yǎng)作用，因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。在pH值條件下的緩沖能力差。2.滲透壓多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)滲透壓有很寬的耐受范圍，一般常用冰點(diǎn)降低或蒸汽壓升高測(cè)定。如果自己配培養(yǎng)基，可通過(guò)測(cè)定滲透壓防止3.粘度培養(yǎng)基的粘度主要受血清含量的影響，在多數(shù)情況下，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有什么影響。在攪拌條件下，用羧甲基纖維素增加培養(yǎng)基的粘度，可減輕細(xì)胞損害。這對(duì)在低血清濃度或無(wú)血清下條件下培養(yǎng)細(xì)胞顯得尤為重要。自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器廠家培養(yǎng)基制備器解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)!

溶化：培養(yǎng)基放入燒杯或瓷缸中，慢慢加入少量所需水，邊加入邊用玻璃棒攪拌。如果培養(yǎng)基中不含有瓊脂，培養(yǎng)基不需要加熱；如果含有瓊脂，則需要用本生燈或電磁爐加熱煮沸，完全溶解后，再補(bǔ)齊所需水，并攪拌均勻。如果配置的培養(yǎng)基量很大，可用不銹鋼鍋加熱溶化，可先用溫水加熱并隨時(shí)攪動(dòng)，防止焦化，如有焦化現(xiàn)象，配制的培養(yǎng)基就不能使用，要重新配制。配制培養(yǎng)基時(shí)不可用銅或鐵的容器溶化，因銅或鐵制容器可能會(huì)使培養(yǎng)基中的銅和鐵的含量超標(biāo)，影響實(shí)驗(yàn)（培養(yǎng)基中銅含量大于0.3mg/L，細(xì)菌不宜生長(zhǎng)，鐵含量超過(guò)0.14mg/L，妨礙細(xì)菌產(chǎn)有害）。對(duì)容易發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀的藥品，要分開(kāi)溶解，較后加入培養(yǎng)基，如磷酸二氫鉀和硫酸鎂。

培養(yǎng)基各成份的混合和溶化:培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長(zhǎng)。好好使用不銹鋼鍋加熱溶化．也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)，以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如為瓊脂培養(yǎng)基，應(yīng)先用一部分水將瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過(guò)程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，較后必須加以補(bǔ)足。培養(yǎng)基制備器勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁.

固體斜面培養(yǎng)基配制步驟：1、培養(yǎng)基配方的選定同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對(duì)，再依據(jù)自己的使用目的，加以選用，記錄其來(lái)源。2、培養(yǎng)基的制備記錄：每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)基名稱，配方及其來(lái)源，和各種成份的牌號(hào)，較終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等，記錄應(yīng)復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳椋瑥?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。3、培養(yǎng)基成分的稱?。号囵B(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂，較好一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?cè)，每稱完一種成分即在配方面軍做出記號(hào)，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。**大規(guī)模生產(chǎn)**：優(yōu)先考慮工業(yè)化滅菌釜（如**Systec高壓滅菌器**）或連續(xù)流培養(yǎng)基制備系統(tǒng)。自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器廠家

**蒸汽加熱**（高壓滅菌鍋）：需關(guān)注蒸汽生成速度及均勻性。山東自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器

培養(yǎng)基配制：配制用水，培養(yǎng)基的大部分是水，所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn)，水的電阻應(yīng)為200萬(wàn)歐姆，一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。培養(yǎng)基：培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2-7.4，若pH值超過(guò)7.6或遠(yuǎn)低于6.8，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。血清：培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體，置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無(wú)血清培養(yǎng)基。山東自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器