數(shù)字PCR技術(shù)是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術(shù)。該技術(shù)將一個樣本分成幾到幾十萬份,分配到不同的反應(yīng)單元,每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子(DNA模板),在每個反應(yīng)單元中分別對目標分子進行PCR擴增;擴增結(jié)束后,將有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,終根據(jù)泊松分布原理以及陽性微滴的比例,計算出待檢靶分子的濃度或拷貝數(shù)。定量:不再依賴于Ct值和標準曲線,直接給出靶序列的起始濃度,實現(xiàn)真正意義上的定量。更高靈敏度與特異性:數(shù)字PCR可實現(xiàn)萬分之一稀有樣本的定量,可用于極微量核酸樣本檢測、復(fù)雜背景下的稀有突變檢測、表達量微小差異鑒定、單細胞基因表達等方面。數(shù)字PCR在分子診斷領(lǐng)域?qū)l(fā)揮巨大的作用,數(shù)字PCR適用于生物標志物研究、拷貝數(shù)變異分析、微生物檢測、轉(zhuǎn)基因生物檢測、mRNA和miRNA檢測、基因相對表達研究等,并對遺傳病、、產(chǎn)前診斷的研究提供了一種全新的技術(shù)思路與手段,具有廣的、不可替代的應(yīng)用前景。數(shù)字PCR技術(shù)min檢測下限可到2copies/ml,比qPCR靈敏度提升了100倍。廣州醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR品牌
PCR常使用目標序列的拷貝數(shù)或某一給定樣品中轉(zhuǎn)基因的百分比來體現(xiàn)方法靈敏度。由于qPCR和dPCR實驗過程所用試劑的兼容性較好,在使用dPCR進行轉(zhuǎn)基因檢測時,通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術(shù)對相同樣品檢測時,兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關(guān)注的問題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765(12板,每板765個微單元)芯片數(shù)字PCR分析儀測定標準物質(zhì)ERM-AD413檢測轉(zhuǎn)基因玉米MON810。該小組應(yīng)用dPCR技術(shù)評估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值,在拷貝數(shù)200-700之間,dPCR與qPCR的測量結(jié)果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比,dPCR在低于拷貝數(shù)200時有被低估的風(fēng)險,在高于拷貝數(shù)1000時有被高估的風(fēng)險。dPCR在同一陣列上同時測量轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源性靶點時,需要稀釋內(nèi)源性靶點和轉(zhuǎn)基因靶點在合理拷貝數(shù)范圍內(nèi)以保證dPCR測量結(jié)果的準確性。美國微滴式數(shù)字PCR價格在dPCR中,樣品被分區(qū),使得樣品內(nèi)單個的核酸分子被定位并被集中在許多分離的區(qū)域內(nèi)。
數(shù)字PCR系統(tǒng)的分散方式?jīng)Q定了分散數(shù)量,其結(jié)果基于統(tǒng)計的方法進行定量,增加反應(yīng)單元數(shù)量(統(tǒng)計樣本量),可以增加其檢測的容量和動態(tài)檢測線性范圍達到和qPCR相近的動態(tài)范圍,同時減小一個反應(yīng)單元中包含多個分子所造成的誤差,達到提高靈敏度和準確度。影響dPCR定量結(jié)果的因素包括:儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準確性以及結(jié)果表達方式。分散方式與數(shù)量由數(shù)字PCR系統(tǒng)決定,分散體積和結(jié)果表達方式需要實驗人員在實驗過程中優(yōu)化得到。
微滴數(shù)字PCR主要是將兩種互不相溶的液體,以其中一種作為連續(xù)相(油),另一種作為分散相(水),在水/油兩相表面張力和剪切共同作用下分散相以微小體積單元的形式存在于連續(xù)中,從而成液滴。這種液滴式的反應(yīng)腔室具有體積小、樣品間無擴散等優(yōu)勢。在ddPCR中,利用微滴發(fā)生器可以一次生成數(shù)萬乃至百萬個納升甚至皮升級別的單個油包水微滴,作為數(shù)字PCR的樣品分散載體。這里,液滴中包裹了單拷貝DNA模板和PCR反應(yīng)液,然后將液滴收集在PCR反應(yīng)管中進行擴增。?PCR反應(yīng)結(jié)束后檢測每個微滴的熒光信號。目前Bio-Rad公司的QX100系統(tǒng)、QX200系統(tǒng)均為采用液滴技術(shù)的數(shù)字PCR系統(tǒng)。圖6.Bio-Rad的液滴數(shù)字PCR系統(tǒng)無創(chuàng)產(chǎn)前篩查有望成為數(shù)字PCR在臨床快速落地的應(yīng)用。
使用ddPCR的一個主要優(yōu)點在于,定量不是相對的。微滴式數(shù)字PCR計算事件的數(shù)量,因此可以確定檢測極限和比較低起始量,以便達到所需的靈敏度。在連續(xù)監(jiān)控或比較不同患者的效果時,這可以更準確地比較負荷,因為所測得的豐度不是相對的。經(jīng)過實驗證實,ddPCRKRASG12/G13ScreeningKit也能夠檢測患者cfDNA樣品中的KRAS突變(圖2)。這些患者的血漿樣品購自ConversantBio和ProMedDx,之前已通過FFPE基因分型被分為KRAS突變陽性或陰性。歡迎咨詢廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司。通過“儀器+試劑”相互配合的方式,打出了數(shù)字PCR檢測的“組合拳”。上海微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)
使用數(shù)字PCR技術(shù)對436例非小細胞肺*樣品進行檢測,并挑選樣本驗證一致性。廣州醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR品牌
精細化學(xué)品主要應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、建筑業(yè)、紡織業(yè)、醫(yī)藥業(yè)、電子設(shè)備等行業(yè)。隨著下游各行業(yè)的進一步發(fā)展,對精細化工材料的需求數(shù)量上升,性能要求進一步提高,精細化工行業(yè)與下**業(yè)之間的關(guān)系變得更加緊密。精細化工中間體產(chǎn)品**性強,需要建立特定銷售渠道,能否與客戶保持長期業(yè)務(wù)合作,將對服務(wù)型企業(yè)日常經(jīng)營和長遠發(fā)展構(gòu)成重大影響。精細化工中間體的質(zhì)量和純度直接影響到終端產(chǎn)品的性能和品質(zhì)。近年來,世界主要大型農(nóng)藥、醫(yī)藥生產(chǎn)企業(yè)為了節(jié)省銷售研發(fā)支出,提高效率,降低危險,紛紛將產(chǎn)品戰(zhàn)略的重點集中于**終產(chǎn)品的研究和市場開拓,而將涉及大量專有技術(shù)的中間體轉(zhuǎn)向?qū)ν獠少?,充分利用外部的?yōu)勢資源,重新確認、配置企業(yè)的內(nèi)部資源。隨著社會經(jīng)濟的進一步發(fā)展,人們對電子、汽車、機械工業(yè)、建筑新材料、新能源及新型環(huán)保材料的需求將進一步上升,電子與信息化學(xué)品、表面工程化學(xué)品、醫(yī)藥化學(xué)品等將得到進一步的發(fā)展,全球范圍內(nèi)精細化學(xué)品市場規(guī)模將保持高于傳統(tǒng)化工行業(yè)的速度飛速增長。廣州醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR品牌
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司公司是一家專門從事數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀產(chǎn)品的生產(chǎn)和銷售,是一家服務(wù)型企業(yè),公司成立于2015-04-17,位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號617房。多年來為國內(nèi)各行業(yè)用戶提供各種產(chǎn)品支持。臻準,美國艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia目前推出了數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀等多款產(chǎn)品,已經(jīng)和行業(yè)內(nèi)多家企業(yè)建立合作伙伴關(guān)系,目前產(chǎn)品已經(jīng)應(yīng)用于多個領(lǐng)域。我們堅持技術(shù)創(chuàng)新,把握市場關(guān)鍵需求,以重心技術(shù)能力,助力精細化學(xué)品發(fā)展。廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司每年將部分收入投入到數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀產(chǎn)品開發(fā)工作中,也為公司的技術(shù)創(chuàng)新和人材培養(yǎng)起到了很好的推動作用。公司在長期的生產(chǎn)運營中形成了一套完善的科技激勵政策,以激勵在技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品改進等。廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司注重以人為本、團隊合作的企業(yè)文化,通過保證數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀產(chǎn)品質(zhì)量合格,以誠信經(jīng)營、用戶至上、價格合理來服務(wù)客戶。建立一切以客戶需求為前提的工作目標,真誠歡迎新老客戶前來洽談業(yè)務(wù)。