數(shù)字聚合酶鏈式反應（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術因具有高靈敏度、受基質(zhì)干擾少等優(yōu)勢而被廣用于轉(zhuǎn)基因食品檢測。本研究綜述了數(shù)字PCR技術的原理、系統(tǒng)各部件的優(yōu)劣勢，梳理了數(shù)字PCR技術在轉(zhuǎn)基因檢測與溯源技術（標準物質(zhì)）方面的進展和發(fā)展趨勢，以期為轉(zhuǎn)基因食品檢測領域提供參考依據(jù)。dPCR的擴增過程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環(huán)擴增和樣品的檢測。對于數(shù)字PCR儀器系統(tǒng)，各個部件之間仍然有較大的改進空間，要發(fā)揮部件之間的協(xié)同作用是很重要的，而且有持續(xù)研究的價值。表1中總結(jié)了部分常見的數(shù)字PCR系統(tǒng)的類型，以及相對在硬件、便攜性、性價比和自動化程度上的比較。數(shù)字PCR主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法。深圳國產(chǎn)數(shù)字PCR系統(tǒng)

數(shù)字PCR技術是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術。該技術將一個樣本分成幾到幾十萬份，分配到不同的反應單元，每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子(DNA模板)，在每個反應單元中分別對目標分子進行PCR擴增；擴增結(jié)束后，將有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0，終根據(jù)泊松分布原理以及陽性微滴的比例，計算出待檢靶分子的濃度或拷貝數(shù)。定量：不再依賴于Ct值和標準曲線，直接給出靶序列的起始濃度，實現(xiàn)真正意義上的定量。更高靈敏度與特異性：數(shù)字PCR可實現(xiàn)萬分之一稀有樣本的定量，可用于極微量核酸樣本檢測、復雜背景下的稀有突變檢測、表達量微小差異鑒定、單細胞基因表達等方面。數(shù)字PCR在分子診斷領域?qū)l(fā)揮巨大的作用，數(shù)字PCR適用于生物標志物研究、拷貝數(shù)變異分析、微生物檢測、轉(zhuǎn)基因生物檢測、mRNA和miRNA檢測、基因相對表達研究等，并對遺傳病、、產(chǎn)前診斷的研究提供了一種全新的技術思路與手段，具有廣的、不可替代的應用前景。深圳國產(chǎn)數(shù)字PCR系統(tǒng)從市場規(guī)模來看，目前數(shù)字PCR市場規(guī)模并不大，全球約1.5億至2.5億美元。

本次推出的全自動數(shù)字PCR一體機可以適用于包括醫(yī)療檢測領域在內(nèi)的多種應用場景。對于可以實現(xiàn)早期篩查、早期診斷、用藥指導以及監(jiān)測的復發(fā)。對于病原體可以實現(xiàn)超多重檢測，以利于快速診斷。在優(yōu)生優(yōu)育領域也可以實現(xiàn)更多遺傳性疾病的診斷和檢測。對于臨床應用具有極大的潛力和價值。通過線上+線下的方式舉行了數(shù)字PCR2.0技術方案研討會，來自醫(yī)療界的**學者共聚一堂，圍繞PCR技術的發(fā)展和應用進行交流和討論。歡迎咨詢廣州雙螺旋科學儀器有限公司。

dPCR的測量結(jié)果通常表示為含量，即拷貝數(shù)值或轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比，而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分數(shù)。目前市場上可購買到大多數(shù)轉(zhuǎn)基因標準物質(zhì)，以qPCR定值的標準物質(zhì)是以拷貝數(shù)（單倍體基因組當量）的質(zhì)量分數(shù)來表示特性量；以dPCR定值的標準物質(zhì)直接采用拷貝數(shù)比例來表示特性量。不同方法使用不同的表示方式，會造成測量結(jié)果不可比。因此質(zhì)量分數(shù)、拷貝數(shù)和拷貝數(shù)比例之間的關系需要轉(zhuǎn)化，才能得到單位一致，數(shù)值可比的數(shù)據(jù)。EU聯(lián)合研究中心建議使用轉(zhuǎn)換因子從拷貝數(shù)換算到質(zhì)量分數(shù)。全自動數(shù)字PCR平臺，讓數(shù)字PCR真正邁入新時代，助推數(shù)字PCR普及應用。

目前dPCR主要有兩種形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中，每個反應器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號，沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。可以使用幾種不同的方法來分配樣品，包括微孔板，毛細管，油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設分子種群遵循泊松分布來估計不同分子的數(shù)量，根據(jù)泊松分布的原理，反應體系中目標分子的拷貝數(shù)可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計算，從而解決了多個目標分子存在于單個液滴中的可能性。dPCR的測量結(jié)果通常表示為含量，即拷貝數(shù)轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比，而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分數(shù)。美國銳訊數(shù)字PCR性能特點

臻準推出新款數(shù)字PCR產(chǎn)品：AccuONE2.0數(shù)字PCR系統(tǒng)。深圳國產(chǎn)數(shù)字PCR系統(tǒng)

在精細診療領域，患者外周血中的循環(huán)DNA（ctDNA），在的早期篩查，圍術期監(jiān)測，藥物療效評估，預后等方面具有重要的臨床應用價值。在肺液體活檢領域，EGFR突變由于其在東亞人群中的高突變率,實現(xiàn)精細檢測顯得尤為重要。研究表明，相較于熒光定量PCR，數(shù)字PCR對于血液ctDNA的檢測靈敏度更高（0.01%），EGFR突變的陽性檢出率也更高。在患者術后復發(fā)檢測中，數(shù)字PCR評估出的ctDNA陽性，可以早于影像學數(shù)月提前揭示出患者復發(fā)。因此，該項技術在肺精細診療中具有重要的作用。深圳國產(chǎn)數(shù)字PCR系統(tǒng)

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