對于檢測需要高靈敏度以及技術(shù)確認的情況下，數(shù)字PCR技術(shù)也可以發(fā)揮重要作用。技術(shù)數(shù)據(jù)表明，數(shù)字PCR技術(shù)對的比較低檢測下限可到2copies/ml，比qPCR靈敏度提升了100倍。經(jīng)測試，數(shù)字PCR在檢測和診斷的某些方面優(yōu)于金標(biāo)準qPCR，尤其是在低病毒載量樣本中，相比起qPCR，數(shù)字PCR特異性、靈敏度、重現(xiàn)性和檢測限受影響更小。因此，未來預(yù)計數(shù)字PCR技術(shù)也將在類疾病中得到更加廣的應(yīng)用。數(shù)字PCR的應(yīng)用甚廣，除了可應(yīng)用于進行突變的檢測以外，也可運用于基因擴增的檢測。通過數(shù)字PCR技術(shù)可建立多重?zé)晒怏w系，用于同時檢測比如非小細胞肺中常見的MET和HER2耐藥擴增。有研究報道，使用數(shù)字PCR技術(shù)對436例非小細胞肺樣品進行檢測，并挑選樣本驗證了數(shù)字PCR與RNA fish的檢測一致性。結(jié)果表明，該數(shù)字PCR技術(shù)在保證了基因擴增檢測準確性的同時，還節(jié)約了檢測時間。dPCR被稱作第三代PCR技術(shù)，但dPCR技術(shù)的廣泛應(yīng)用逐漸顯現(xiàn)出一些不足之處。上海一體化數(shù)字PCR分析應(yīng)用

作為時下的熱點技術(shù)，數(shù)字PCR是將核酸樣品分配到大量單獨、平行的微反應(yīng)單元（nL，納升級別）中，使得每個反應(yīng)單元中盡可能含有1個模板分子，并在此基礎(chǔ)上進行擴增、檢測和分布統(tǒng)計，從而實現(xiàn)靶標(biāo)分子的比較 計數(shù)。（圖：數(shù)字PCR技術(shù)原理）根據(jù)微反應(yīng)單元的不同形式，數(shù)字PCR產(chǎn)品可分為微板式、微滴式和芯片式等。目前，市場上主要的數(shù)字PCR產(chǎn)品主要是基于微滴式和芯片式，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系統(tǒng)和ThermoFisher公司的QuantStudio系統(tǒng)等。與一、二代PCR技術(shù)相比，數(shù)字PCR具有很多優(yōu)勢：一是特異性、靈敏性均有顯著提高；二是在不依賴內(nèi)參和標(biāo)準曲線的前提下，可直接得到比較 量化指標(biāo)；三是微反應(yīng)單元相互獨立、封閉，避免了PCR抑制劑及不同核酸分子擴增產(chǎn)物間的相互干擾，準確度和可重復(fù)性較高。蘇州微滴式數(shù)字PCR熒光通道數(shù)字PCR是直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的定量。

引物設(shè)計（DesignPrimers）：引物長度（PrimerLength）：18-25個堿基之間。短的引物更易于同靶序列結(jié)合，但過短的引物也更可能同基因組上的多個區(qū)域相結(jié)合而產(chǎn)生非特異性擴增產(chǎn)物。更長的引物會提高同靶序列結(jié)合的特異性，但過長的引物（>30bp）同靶序列結(jié)合速度變慢，降低結(jié)合率。引物長度和組成直接影響引物Tm值（PrimerMeltingTemperature）和退火溫度（AnnealingTemperatures）。引物的組成——GC%含量（GCContent）：指引物總堿基中G和C堿基數(shù)量的百分比，該值應(yīng)在40-60%之間。如果模板序列的GC含量較高，推薦使用較高Tm值的引物。

Drop-off實驗包括兩個針對相同擴增子的TaqMan探針：與野生型序列互補而與突變位點不發(fā)生互補的Drop-off探針和與突變型和野生型基因都互補的Reference探針（如圖1A）。在野生型等位基因的存在下，Drop-off探針和Reference探針都將與目標(biāo)雜交，產(chǎn)生雙重陽性信號（如圖1B，藍色群）。相反，如果存在突變的等位基因，即使一個核苷酸的突變也會阻止Drop-off探針與之雜交，因此只有Reference探針對目標(biāo)基因進行退火，從而得到一個陽性信號。相同模板進行 96 次擴增，終點處產(chǎn)物量不恒定，但 Ct 值卻極具重現(xiàn)性。

在使用dPCR進行轉(zhuǎn)基因檢測時，通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術(shù)對相同樣品檢測時，兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關(guān)注的問題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765個微單元）芯片數(shù)字PCR分析儀測定標(biāo)準物質(zhì)ERM-AD413檢測轉(zhuǎn)基因玉米MON810。該小組應(yīng)用dPCR技術(shù)評估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值，在拷貝數(shù)200-700之間，dPCR與qPCR的測量結(jié)果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比，dPCR在低于拷貝數(shù)200時有被低估的風(fēng)險，在高于拷貝數(shù)1000時有被高估的風(fēng)險。dPCR在同一陣列上同時測量轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源性靶點時，需要稀釋內(nèi)源性靶點和轉(zhuǎn)基因靶點在合理拷貝數(shù)范圍內(nèi)以保證dPCR測量結(jié)果的準確性。臻準推出新款數(shù)字PCR產(chǎn)品：AccuONE2.0數(shù)字PCR系統(tǒng)。上海一體化數(shù)字PCR分析應(yīng)用

數(shù)字PCR主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法。上海一體化數(shù)字PCR分析應(yīng)用

全自動樣本制備系統(tǒng)DMX-1000配備氣流發(fā)生裝置和氣壓控制裝置，能夠?qū)崿F(xiàn)高精度壓力控制，結(jié)合**產(chǎn)品液滴生成芯片和微流控乳液滴生成技術(shù)，DMX-1000可以在70秒內(nèi)快速、穩(wěn)定、高效地生成大小均一的微乳液滴。微滴數(shù)量可達2萬-60萬個，粒徑范圍30-120μm，性能穩(wěn)定。除此之外，銳訊還提供微流控芯片的定制服務(wù)，以滿足不同的液滴數(shù)目和尺寸要求。平板式快速擴增儀TC-1000，不再使用傳統(tǒng)的96孔板，而是特制的液滴擴增芯片；不再是傳統(tǒng)的“燒開水”加熱模式，代之以平板式單液滴層均勻受熱的方式。在這樣的改進之下，TC-1000完成40個PCR循環(huán)只需約45分鐘（TC-2.0升級版更是把時間縮短到了25分鐘！），大幅縮短了等待時間，提升了實驗進度。這對實驗人員而言，無疑是莫大的福利——高效完成工作，不加班——愛工作，也愛生活。上海一體化數(shù)字PCR分析應(yīng)用

廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司在數(shù)字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀一直在同行業(yè)中處于較強地位，無論是產(chǎn)品還是服務(wù)，其高水平的能力始終貫穿于其中。公司位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號617房，成立于2015-04-17，迄今已經(jīng)成長為精細化學(xué)品行業(yè)內(nèi)同類型企業(yè)的佼佼者。雙螺旋科學(xué)儀器以數(shù)字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀為主業(yè)，服務(wù)于精細化學(xué)品等領(lǐng)域，為全國客戶提供先進數(shù)字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀。多年來，已經(jīng)為我國精細化學(xué)品行業(yè)生產(chǎn)、經(jīng)濟等的發(fā)展做出了重要貢獻。