熒光定量PCR儀因操作方便、運行速度快、實驗結(jié)果準確，受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術(shù)成熟的現(xiàn)今，難得不是實驗技術(shù)上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算，更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳資料。面對各種不同性能的產(chǎn)品，您又該如何選擇呢？首先建議大家走出認識熒光定量PCR的兩個誤區(qū)：誤區(qū)一：儀器通道越多越好隨著PCR技術(shù)的成熟運用，多重擴增越來越熱鬧，熒光定量PCR儀也不能幸免。在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時，為了確保實驗結(jié)果的精確性和準確性都要在實驗中使用ROX（一種熒光染料）或Referencedye，這些熒光染料都必須單獨使用一個檢測通道。這樣以來，真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個，而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本?？紤]多重熒光定量PCR的通道數(shù)的時候也應該從實驗室實際情況出發(fā)，多重PCR并非人人適用、人人可用，因為它使實驗復雜化了。誤區(qū)二：real-timePCR儀無需梯度功能對于使用染料法的定量PCR反應，雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經(jīng)驗公式計算熔解溫度（Tm值），但運用的公式不同、引物序列不同。PCR擴增過程中，熒光定量PCR儀通過熒光信號，對PCR進程進行實時檢測。PCR儀廠家報價

    PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一種分子生物學技術(shù)，用于放大特定的DN段，可看作生物體外的特殊DNA復制。其特點是能將微量的DNA大幅增加，是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法，PCR實驗室廣泛應用于生物學各個領(lǐng)域，PCR實驗室主要實驗項目：檢測，乙型肝炎，禽疫病，基因的檢測和診斷，DNA指紋，個體識別，親子鑒定及法醫(yī)物證等等。pcr實驗室設計建設中容易出現(xiàn)的問題：1、PCR實驗室的空氣流向必須嚴格按照試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進行，防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域。需要嚴格的通風設計，若通風設計不合理，會使風速流向混亂，甚至危害人們健康。2、人流路徑與物流路徑設計不合理進入實驗室區(qū)域工作人員應該按照以下路徑：公共清潔區(qū)——更衣間（更換潔凈服）——緩沖間——污染實驗區(qū)工作人員退出實驗室的路徑為：污染試驗區(qū)——緩沖間——淋浴間。 力康核酸定量PCR儀價格便宜PCR儀被大量運用于醫(yī)學、生物學實驗室中。

    實時熒光定量pcr儀，由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成，用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正?；罂梢栽O定域值水平，這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。實時熒光定量pcr儀組成熒光定量系統(tǒng)和計算機作用，監(jiān)測循環(huán)過程的熒光，數(shù)據(jù)形式顯示，通過開發(fā)的實時分析，軟件以圖表的表現(xiàn)。實時熒光定量pcr儀優(yōu)勢：樣品到達域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值（限制點的循環(huán)數(shù)）。域值應設定在使指數(shù)期的擴增效率為大，這樣可以獲得準確，可重復性的數(shù)據(jù)。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品，線性回歸分析將產(chǎn)生一條標準曲線，可以用來計算未知樣品的濃度。實時熒光定量pcr儀技術(shù)原理：所謂real-timeQ-PCR技術(shù)，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在real-time技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn)。

    并含有能用于探針捕捉雜交實驗的足夠信息。這一長度范圍的產(chǎn)物可以通過采用兩步擴增循環(huán)方法得到，從而減少擴增時間。其他PCR方法有不同的佳產(chǎn)物長度。例如，通過定量的RNA-PCR檢測基因表達時，產(chǎn)物應該足夠大以便構(gòu)成競爭性模板，這樣，產(chǎn)物和競爭物都能夠在凝膠上很容易的分辨出來。這些產(chǎn)物一般在250～750bp范圍內(nèi)。⑦補充說明若在cDNA序列內(nèi)找尋PCR引物，需特別注意兩點：首先，盡力將引物和產(chǎn)物保持在mRNA的編碼區(qū)域內(nèi)，因為這是生成蛋白質(zhì)的獨特序列，不像3’末端非編碼區(qū)域與許多其他mRNA有同源性；第二，盡力把引物放在不同的外顯子上，以便使RNA特異的PCR產(chǎn)物與從污染DNA中產(chǎn)生的產(chǎn)物在大小上相區(qū)別。若PCR的目的是克隆一個基因或cDNA的特異序列，產(chǎn)物的大小是根據(jù)具體應用預選的。在這里，計算機程序可以提供關(guān)于期望區(qū)域側(cè)翼選擇引物對的信息。在選擇用來擴增來自不同物種DNA的引物時，應避開mRNA的5’和3’末端非翻譯區(qū)序列，因為它們可能沒有任何的同源性。3．簡并引物設計①設計簡并引物時，一定要檢查靶擴增區(qū)域選定氨基酸遺傳密碼的簡并度。很顯然，我們期望選擇簡并度低的氨基酸，達到提高特異性的目的。②充分注意物種對于密碼子的偏好性。 普通PCR儀主要應用于科研、教學、臨床醫(yī)學、檢驗、檢疫等。

力康GM05智能梯度基因擴增儀（控溫儀）性能特點：高清晰超大7寸液晶顯示屏-可選鍍金/鍍銀模塊，提高熱傳導效率，使實驗更高效；方便靈活的模塊更換裝置，輕松更換模塊；熱蓋旋鈕無級可調(diào)，適用各型號試管；樣品座工作區(qū)域全密閉設計，可確保低溫保存干燥清潔；可任意角度定位熱蓋；具備斷電記憶功能；環(huán)境溫度自動讀取，自動修正溫控誤差；支持用戶實驗預約設定，鬧鐘提醒功能；支持程序搜索功能，支持常用程序優(yōu)先選擇功能；支持多重嵌套循環(huán)；支持梯度PCR、TouchdownPCR、LongPCR設定；可外接移動硬盤和鼠標，支持觸摸和鼠標操作；可實現(xiàn)遠程故障判斷；具有TM值計算功能，可更好地幫助用戶進行引物設計；可單獨配備PC機操作軟件，PC機與主機可分別各自控制，并實現(xiàn)一機多控。PCR儀是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。上海力康國產(chǎn)品牌PCR儀價格表格

PCR技術(shù)起初的臨床應用就是從檢測鐮狀細胞和β-地中海貧血的基因突變開始的。PCR儀廠家報價

    1．一般性原則(1)長度：一般引物互補區(qū)的長度為16-25bp，引物互補區(qū)的4×(G十C)十2×(A十T)不要沒有必要大于70，一般也不要低于50(2)G十c含量：好在45％一55％之間，但有時受模板限制，無法理想化。但在有幾種選擇時，可以把G十c含量接近50%作為參數(shù)之一(3)堿基分布的隨機性：應避免連續(xù)出現(xiàn)4個以上的單一堿基。尤其是不應在其3’端出現(xiàn)超過3個的連續(xù)G或C，否則會使引物在G十C富集序列區(qū)錯誤引發(fā)。(4)引物自身：不能含有很長的牢固的自身互補序列，尤其是引物3‘端回折形成的發(fā)夾不要一般超過3堿基，否則會影響引物與模板的結(jié)合(5)引物之間：兩個引物之間不應有很長的牢固的互補或同源堿基，尤應避免3’端的互補重疊。2.具體原則①引物長度；特異性一般通過引物長度和退火溫度控制。如果PCR的退火溫度設置在近于引物Tm值（引物/模板雙鏈體的解鏈溫度）幾度的范圍內(nèi)，18到24個堿基的寡核苷酸鏈是有很好的序列特異性的。引物越長，擴增退火時被引發(fā)的模板越少。為優(yōu)化PCR反應，使用確保溶解溫度不低于54℃的短的引物，可獲得好的效率和特異性。總的來說，好在特異性允許的范圍內(nèi)尋求安全性。每增加一個核苷酸，引物特異性提高4倍；這樣，大多數(shù)應用的短引物長度為18個核苷酸。 PCR儀廠家報價

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