在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)的PCR儀稱作熒光定量PCR儀。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同,只是PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。把這種PCR儀叫做實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(qPCR儀)。熒光定量PCR儀有單通道、雙通道和多通道。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候,選用單通道,有多熒光標(biāo)記的時(shí)候用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記的目的基因表達(dá)產(chǎn)物,因?yàn)橐淮沃荒軝z測一種目的基因的擴(kuò)增量,需多次擴(kuò)增才能檢測完不同目的基因片段的量。主要用于醫(yī)學(xué)臨床檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等機(jī)構(gòu)。根據(jù)DNA擴(kuò)增時(shí)升溫介質(zhì)的不同可以將PCR儀分為:變溫鋁塊式PCR儀、水浴式PCR儀和變溫式流式PCR儀。1.變溫鋁塊式PCR儀熱源用電阻絲、導(dǎo)電熱膜、熱泵式珀?duì)柼雽?dǎo)體元件制作,讓帶有凹孔的鋁塊升溫,用自來水、制冷壓縮機(jī)或半導(dǎo)體降溫。優(yōu)點(diǎn):溫度傳導(dǎo)快,各管的擴(kuò)增一致性好;反應(yīng)管規(guī)格一致時(shí)無須外涂石蠟油;可用微電腦調(diào)節(jié)溫度轉(zhuǎn)換。 PCR實(shí)驗(yàn)室在儀器設(shè)備等硬件上要滿足開展臨床檢驗(yàn)的條件,包括生物安全柜和PCR儀。實(shí)時(shí)定量PCR儀廠家直供
原位PCR儀:用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀稱作原位PCR儀。如病源基因在細(xì)胞的位置或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等。是保持細(xì)胞或組織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中,在細(xì)胞的靶DNA所在位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增。不但可以檢測到靶DNA,又能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置,對(duì)于在分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有重大的實(shí)用價(jià)值。主要應(yīng)用于臨床、科研。原位PCR儀,主要應(yīng)用于:檢測外源性基因片段,提高檢出率,集中在病毒的檢查上,如HIV、HPV、HBV、CMV等;觀察病原體在體內(nèi)分布規(guī)律;內(nèi)源性基因片段,如人體的單基因病、重組基因、易位的染色體、Ig的mRN段、基因片段等;檢測導(dǎo)入基因;遺傳病基因檢測如β-地中海貧血。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀:在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)的PCR儀稱作熒光定量PCR儀。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同,只是PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。把這種PCR儀叫做實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。檢驗(yàn)室國產(chǎn)PCR儀批發(fā)廠家PCR儀器需要定期檢測,視制冷方式而定一般半年至少一次。
引物設(shè)計(jì)時(shí)使合成的寡核苷酸鏈(18~24聚物)適用于多種實(shí)驗(yàn)條件仍不失為明智之舉。②引物的二級(jí)結(jié)構(gòu)包括引物自身二聚體、發(fā)卡結(jié)構(gòu)、引物間二聚體等。這些因素會(huì)影響引物和模板的結(jié)合從而影響引物效率。對(duì)于引物的3’末端形成的二聚體,應(yīng)控制其ΔG大于,因?yàn)榇朔N情形的引物二聚體有進(jìn)一步形成更穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的可能性,引物中間或5’端的要求可適當(dāng)放寬。引物自身形成的發(fā)卡結(jié)構(gòu),也以3’端或近3’端對(duì)引物-模板結(jié)合影響更大;影響發(fā)卡結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性的因素除了堿基互補(bǔ)配對(duì)的鍵能之外,與莖環(huán)結(jié)構(gòu)形式亦有很大的關(guān)系。應(yīng)盡量避免3’末端有發(fā)卡結(jié)構(gòu)的引物。③引物GC含量和Tm值PCR引物應(yīng)該保持合理的GC含量。含有50%的G+C的20個(gè)堿基的寡核苷酸鏈的Tm值大概在56~62℃范圍內(nèi),這可為有效退火提供足夠熱度。一對(duì)引物的GC含量和Tm值應(yīng)該協(xié)調(diào)。協(xié)調(diào)性差的引物對(duì)的效率和特異性都較差,因?yàn)榻档土薚m值導(dǎo)致特異性的喪失。這種情況下引物Tm值越高,其錯(cuò)誤引發(fā)的機(jī)率也越大。若采用太高的退火溫度,Tm值低的引物對(duì)可能完全不發(fā)揮作用。在從一批在特定序列范圍內(nèi)已合成好的寡核苷酸中選擇一對(duì)新的引物時(shí),這種GC含量和Tm值的協(xié)調(diào)非常關(guān)鍵。一般來說。
移動(dòng)箱式PCR實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格按照生物安全實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)建造,配備有各類儀器設(shè)備,注重保障實(shí)驗(yàn)人員安全,同時(shí)具備機(jī)動(dòng)靈活、反應(yīng)迅速等特點(diǎn),協(xié)助前線醫(yī)院開展檢測工作,為防控奉獻(xiàn)綿薄之力。由于集裝箱在出廠前已經(jīng)完成了單個(gè)箱體里面配置的所有安裝,水、電、風(fēng)、廢水和廢氣排放等系統(tǒng)已經(jīng)在箱體配備,同時(shí)保證了外面環(huán)境的安全。在現(xiàn)場基礎(chǔ)平整的條件下,只需要簡單的進(jìn)行箱體吊裝安放、給水和用電對(duì)接即可——在極端情況下甚至可以在無水無電的情況下短時(shí)運(yùn)行,真正做到組裝迅速。對(duì)接安裝本身不需要非常專業(yè)的人員,常規(guī)的疾控維修人員或工程人員就可以完成對(duì)接。箱體安放位置一般在室外,對(duì)于病人的隔離或控制病毒擴(kuò)散都是有利的。室外空氣流通快,不會(huì)像室內(nèi)空氣那樣高度聚集及停留產(chǎn)生氣溶膠導(dǎo)致病毒擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)加大,箱式PCR實(shí)驗(yàn)室有效的避免了聚集性和傳染性,當(dāng)箱式PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部環(huán)境受到污染時(shí),可以快速通過送排風(fēng)系統(tǒng)置換新鮮的空氣達(dá)到實(shí)驗(yàn)室凈化的要求。箱式PCR實(shí)驗(yàn)室可以重復(fù)使用,當(dāng)結(jié)束以后,經(jīng)過專業(yè)人員的消毒,可以重新運(yùn)到疾控中心、醫(yī)院、港口或者第三方檢測等單位再次使用,也可經(jīng)過專業(yè)存放和維護(hù),待需要時(shí)重新投入使用。PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物.
普通PCR儀:一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀稱作傳統(tǒng)PCR儀,也叫普通PCR儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運(yùn)行。主要是用于簡單的、對(duì)目的基因退火溫度的擴(kuò)增。該儀器主要應(yīng)用于科學(xué)研究、教學(xué)、醫(yī)學(xué)臨床、檢驗(yàn)檢疫等機(jī)構(gòu)。
梯度PCR儀:一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度,通常有12種溫度梯度)的PCR儀稱作梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同DN段,其適退火溫度是不同的,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性PCR擴(kuò)增,就可以篩選出表達(dá)量高的適退火溫度,進(jìn)行有效的擴(kuò)增。用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣節(jié)約成本的同時(shí)也節(jié)約了時(shí)間。梯度PCR儀在不設(shè)置梯度的情況下也可以做普通PCR擴(kuò)增。主要應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)。梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣既節(jié)約時(shí)間,也節(jié)約成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu),檢驗(yàn)、檢疫等。 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。檢驗(yàn)室國產(chǎn)PCR儀批發(fā)廠家
PCR的三個(gè)反應(yīng)(變性-退火-延伸)0步驟反復(fù)進(jìn)行,使DNA擴(kuò)增量呈指數(shù)上升。實(shí)時(shí)定量PCR儀廠家直供
PCR儀的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:1、模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;2、模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;3、引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈",而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2~4分鐘,2~3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍(Plateau)。到達(dá)平臺(tái)期所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。在此同時(shí)認(rèn)識(shí)到蛋白質(zhì)是接受RNA的遺傳信息而合成的。50年代Zamecnik等在形態(tài)學(xué)和分離的亞細(xì)胞組分實(shí)驗(yàn)中已發(fā)現(xiàn)微粒體(microsome)是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的部位。 實(shí)時(shí)定量PCR儀廠家直供
力新儀器(上海)有限公司是一家三類:6815注射穿刺器械,6821醫(yī)用電子儀器設(shè)備(不含植入類重點(diǎn)監(jiān)管),6822醫(yī)用光學(xué)器具、儀器及內(nèi)窺鏡設(shè)備(不含植入類重點(diǎn)監(jiān)管),6823醫(yī)用超聲儀器及有關(guān)設(shè)備,6824醫(yī)用激光儀器設(shè)備,6825醫(yī)用高頻儀器設(shè)備,6826物理***及康復(fù)設(shè)備,6828醫(yī)用磁共振設(shè)備,6830醫(yī)用x射線設(shè)備,6832醫(yī)用高能射線設(shè)備,6833醫(yī)用核素設(shè)備,6845體外循環(huán)及血液處理 設(shè)備,6854手術(shù)室、急救室、診療室設(shè)備及器具,6858醫(yī)用冷療、低溫、冷藏設(shè)備及器具,6864醫(yī)用衛(wèi)生材料及敷料,6866醫(yī)用高分子材料及制品(不含重點(diǎn)監(jiān)管),6870軟件,6877介入器材(不含重點(diǎn)監(jiān)管)***的公司,是一家集研發(fā)、設(shè)計(jì)、生產(chǎn)和銷售為一體的專業(yè)化公司。公司自創(chuàng)立以來,投身于數(shù)字化手術(shù)室,實(shí)驗(yàn)室儀器,新生兒科設(shè)備,ICU重癥產(chǎn)品,是醫(yī)藥健康的主力軍。力新儀器不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,以技術(shù)為先導(dǎo),以產(chǎn)品為平臺(tái),以應(yīng)用為重點(diǎn),以服務(wù)為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值,提供更優(yōu)服務(wù)。力新儀器始終關(guān)注醫(yī)藥健康行業(yè)。滿足市場需求,提高產(chǎn)品價(jià)值,是我們前行的力量。