小鼠尾尖用酒精擦拭尾巴,引起輕微的血管擴張;用無菌手術(shù)刀、刀片或鋒利的剪刀,快速截斷小鼠尾尖1-2毫米。如果需要多次,之后每次需截除2-3毫米;從尾部像尾尖方向按摩,增加血流;用采集血液;結(jié)束后,按壓傷口或使用止血劑來止血;每次量大約可達。小鼠眼球取血單手保定好小鼠;必要時剪掉小鼠胡須,防止污染血液;輕壓取血側(cè)眼部皮膚,使眼球充血突出;用彎頭鑷夾取眼球并快速在摘??;同時用左手中指輕按小鼠心臟部位,以加快心臟泵血速度;當血液流盡時,用脫臼法處死小鼠;大鼠眼眶取血先將小鼠進行麻醉,大鼠翻正反射消失時不在繼續(xù)麻醉;抗凝處理過的玻璃毛細采樣管,掰成2-3厘米長度;右手食指和拇指輕按眼眶兩側(cè)皮膚,使眼球突出,毛細管從內(nèi)側(cè)的眼球與眼瞼的縫隙處進入,輕輕旋轉(zhuǎn)毛細管,稍微深入眼球后上方,血液流速快的時候4-5滴即可,溫柔的將毛細管取出;用棉簽按壓大鼠眼眶止血,每次可取血50-100微升,將血液放入冰盒中保存。小鼠心臟取血先將小鼠麻醉,稍靠右側(cè)平躺在手術(shù)板上固定;左側(cè)第三四根肋骨間觸摸心臟,跳動明顯,慢慢進針;針有回血停止進針,開始取血;一次可以300到500微升,小鼠存活,放到加熱墊上待小鼠蘇醒后放入籠中??偟膩碚f,動物疾病模型是一種重要的研究工具,可以幫助科學(xué)家們更好地了解疾病的發(fā)生機制和開發(fā)新方法.北京動物科研技術(shù)服務(wù)實驗室
RNA各種可逆的化學(xué)修飾被認為是一種新的表觀遺傳調(diào)控方式。m6A是真核生物mRNA常見的化學(xué)修飾,在調(diào)控mRNA穩(wěn)定性,剪切和翻譯方面具有重要的作用。作者使用轉(zhuǎn)錄組測序發(fā)現(xiàn)了METTL3(甲基轉(zhuǎn)移酶3),一種主要的RNAN6-腺苷-甲基轉(zhuǎn)移酶,在人肝細胞(HCC)和多種實體中高表達。在臨床上,METTL3的過度表達與肝細胞患者不良預(yù)有關(guān)。體外實驗證明敲除METTL3會抑制HCC細胞增殖,遷移及克隆形成。體內(nèi)實驗證明敲除METTL3會明顯抑制HCC體內(nèi)成瘤和肺轉(zhuǎn)移。另外,使用CRISPR/dCas9-VP64系統(tǒng),內(nèi)源性高表達METTL3會促進HCC細胞在體外和體內(nèi)生長。通過轉(zhuǎn)錄組測序、m6A-Seq、MeRIP-PCR,作者確定了SOCS2(細胞因子信號2的抑制因子)作為METTL3介導(dǎo)的m6A修飾的下游靶基因。敲除METTL3表達會消除SOCS2mRNAm6A修飾并增強SOCS2mRNA表達。m6A介導(dǎo)的SOCS2mRNA降解是依賴于m6A“讀取器”蛋白YTHDF2??傊琈ETTL3在HCC大部分高表達中,并通過m6A-YTHDF2依賴機制抑制SOCS2表達從而促進HCC進展。因此,作者發(fā)現(xiàn)了在肝發(fā)生過程中表觀遺傳改變的一種新機制。圖4RNA甲基化轉(zhuǎn)移酶METLLT3在肝組織中高表達。天津疾病模型科研技術(shù)服務(wù)外包可以發(fā)現(xiàn)與疾病發(fā)生相關(guān)的關(guān)鍵基因和蛋白質(zhì),從而為疾病的預(yù)防和檢查提供新的思路。
中華文化促進會文化創(chuàng)新與傳播委員會會長朱建聲、西安海棠學(xué)院院長馮居秦、西安交通大學(xué)人文學(xué)院EDP中心主任、中華風(fēng)采人物媒體社長王天保、西安市EMBA助企商會會長張西安、陜西省糖尿病協(xié)會副會長張麗、陜西省養(yǎng)生協(xié)會會長李靖、陜西省職業(yè)經(jīng)理人協(xié)會名譽會長劉志超、西藏鷹山科技集團董事長張沛、西安天歌干細胞健康管理中心總經(jīng)理楊海軍和團隊及各行各業(yè)企業(yè)界朋友、受益者近200人參與了活動。西安天歌干細胞健康管理有限公司總經(jīng)理楊海軍介紹了成立一年來的工作情況和未來的發(fā)展布局。隨后,天歌干細胞健康管理中心負責(zé)人分別同中華文化促進會文化創(chuàng)新與傳播委員會會長朱建聲;西安市(EMBA助企商會)/西安市EMBA商會會長張西安;鄭州天歌干細胞健康管理有限公司總經(jīng)理張永紅和上海豪景醫(yī)療器械有限公司總經(jīng)理張建國進行了簽約儀式。主持人同中華風(fēng)采人物媒體社長、新時代風(fēng)采人物研究會會長、文化名人收藏大家王天保,中華風(fēng)采人物媒體主編李西紅,西藏鷹山科技集團董事長張沛分別從幾個話題闡述和討論了大健康產(chǎn)業(yè)的未來前景。為了答謝各界朋友的的支持與厚愛,活動舉行了現(xiàn)場抽獎環(huán)節(jié),將活動掀起了高潮。通過活動一方面讓大家和身邊的朋友更關(guān)注健康。
用伊紅乙醇液對比染色1~3min。(4)將切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色,然后放入無水乙醇中3~5min,吸干后將切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3~5min。3、觀察在鏡下可見卵巢呈扁橢圓形,表面為單層扁平上皮細胞或單層立方上皮,卵巢實質(zhì)分為皮質(zhì)和髓質(zhì)??梢娚掀?,原始卵泡和生長卵泡。卵巢組織中各發(fā)育階段卵泡及卵巢基質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰可見,細胞核呈藍紫色,細胞質(zhì)及間質(zhì)成分呈淺紅色,卵泡中卵母細胞、卵泡細胞、透明帶均清晰可見。注意事項1.取材注意事項(1)取材動作要迅速,不宜作太久的拖延以免組織細胞的成分、結(jié)構(gòu)等發(fā)生變化。(2)切片材料應(yīng)根據(jù)需要觀察的部位進行選擇,盡可能不要損傷所需要的部分。(3)切取的組織塊不宜太大,以利于固定劑穿透,通常以5mmx5mmx2mm或10mmx10mmx2mm為宜。2.固定注意事項(1)一般固定液,都以新配為好,配好后應(yīng)貯存在陰涼處,不宜放在日光下,以免引起化學(xué)變化,失去固定作用。(2)有些混合固定液的成份之間會發(fā)生氧化還原作用,一定要在使用前才混合,如果混合太早,固定時就沒有作用了。(3)固定材料時,固定液必須充足,一般為材料塊的20~30倍,有些水分多的材料,中間應(yīng)更換1~2次新液。(4)材料固定完畢后。干貨分享 | 避坑,微生物培養(yǎng)的污染因素及預(yù)防方法,少走彎路。
外泌體生物發(fā)生和神經(jīng)元細胞中分泌小泡的調(diào)節(jié)之間的交集為外泌體和神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機制之間假定的聯(lián)提供了新的見解。與研究外泌體在其他疾病中的作用相比,外泌體中的研究進展迅速,而且外泌體與的幾個主要特征有關(guān)。外泌體影響、生長和轉(zhuǎn)移、副綜合征和耐藥性。外泌體在進展中的作用可能是動態(tài)的,并且與的類型、遺傳學(xué)和分期有關(guān)。外泌體的應(yīng)用外泌體用于免疫基于免疫細胞來源的外泌體能夠介導(dǎo)和調(diào)節(jié)機體對的免疫反應(yīng),外泌體在免疫方面的潛力受到關(guān)注。其中樹枝狀細胞產(chǎn)生的外泌體包含大量的MHC-多肽復(fù)合物和免疫刺激相關(guān)的分子,能夠相關(guān)的T細胞,介導(dǎo)體內(nèi)抗應(yīng)答,在多個臨床試驗中表現(xiàn)出良好的抗療效。有研究者考察了樹枝狀細胞外泌體對非小細胞肺患者的療效。結(jié)果表明,患者對樹枝狀細胞外泌體耐受性良好,1/3患者表現(xiàn)出了對樹枝狀細胞外泌體的T細胞響應(yīng),2/4患者自然殺傷細胞活性得以。另有研究者公布了利用自體樹突狀細胞外泌體免疫轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的臨床一期試驗結(jié)果,發(fā)現(xiàn)自體樹突狀細胞外泌體無明顯毒性,并且具有刺激自然殺傷細胞的能力。以上臨床試驗證明了外泌體免疫療法的安全性和可行性,為進一步臨床研究奠定了基礎(chǔ)。常用于研究細胞的成瘤能力、細胞的轉(zhuǎn)移、細胞的耐藥和靶分子對腫瘤細胞的發(fā)展的影響等等。山西實驗科研技術(shù)服務(wù)分離
免疫沉淀技術(shù)是一種研究蛋白質(zhì)間交互作用的生物技術(shù)。北京動物科研技術(shù)服務(wù)實驗室
我們知道WB實驗步驟繁瑣,一次實驗歷時也不短,從提蛋白到顯影結(jié)束可能要三天,我們就講一下這里面的一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)。一、蛋白提取及變性1、提取蛋白很多經(jīng)驗豐富的WB實驗者都深有體會,蛋白提取是影響結(jié)重要的環(huán)節(jié)之一。該過程重要的是防降解和保證蛋白濃度不要太低。防降解主要有兩點,一是裂解前注意保持樣品處于低溫環(huán)境中,二是裂解時加入足夠的蛋白酶抑制劑。我們習(xí)慣先用冰冷的PBS做心臟的體循環(huán)灌注,然后冰上取腦,分離各腦區(qū)(嗅球,皮層,海馬,中腦,小腦,延髓,丘腦,紋狀體)后置于,用液氮速凍后轉(zhuǎn)移至-80度冰箱長期保存。接著是保證蛋白濃度,即要加入適量的裂解液,加太少會使蛋白提取不充分,加太多會讓蛋白濃度太低,一般經(jīng)驗是這樣的,細胞樣品例如一個六孔板的細胞加60微升的裂解液,動物組織的話每毫克組織加10微升裂解液。還要加上超聲破碎處理,具體方案見討論部分。如果沒有超聲破碎儀,那就用1毫升注射器不斷抽吸,冰上反復(fù)抽吸1分鐘左右,注意不要產(chǎn)生過多氣泡。(需要灌注取材的視頻可以私聊獲取,由于文件過大,又比較血腥,不宜直接放到文章里。)2、蛋白變性加入上樣緩沖液后100攝氏度煮10分鐘,這里的上樣緩沖液有兩種可選。北京動物科研技術(shù)服務(wù)實驗室