brain：腦組織；liver：肝臟；retina：視網膜，intestine：腸；muscle：肌肉；heart：心臟；kidney：腎臟；spleen：脾；b：圖1中a的統(tǒng)計結果；c:westernblot檢測gm20541蛋白在不同組織的表達；d:圖1中c的統(tǒng)計結果。圖2：gm20541基因敲除小鼠的構建路線；圖中sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖3：中長距離pcr鑒定子一代鼠的結果；圖中：a：擴增5’端長臂使用引物對gm5’lrf和sa3’r,擴增產物為；其中a2,3,6,9,10,b1為陽性；b：擴增3’端長臂使用引物對neof和gm3’lrr，擴增產物為。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子，+/+為野生型對照。圖4：gm20541基因敲除小鼠的鑒定；a：gm20541基因敲除小鼠的基因型鑒定結果；b：實時定量pcr實驗分析gm20541敲除小鼠視網膜中基因敲除效率，證明gm20541在敲除小鼠視網膜中不再表達；sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖5：暗適應視網膜電圖(electroretinogram,erg)檢測結果；圖中：a-c：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應視網膜電圖軌跡圖；d：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應視網膜電圖a波統(tǒng)計。高脂飼料致高脂血癥大鼠模型。寧夏C57動物模型

    agtacacacactggagagaaaccctataaatgtaaccagtgtggtaaagcctttgcatatcacattactctccgaacacataaaggaacacacactgaagagaaaccctatgaatgtaaccaatgtggtaaagcctttgcatattccaacagtctccaaatacatcaaagaacacacactggagagaaaccctatgaatgtaaccagtgtggtaaagcctttgcatatcacaatagtctccaaatacataaaagtacacacactggagagaaaccctatgaatgtaaccagtgtggtaaagcctttgtatgtagcagtcattttcaaaggcataaaaaaattcatactggagagaaaccctatgattgtaaccagtgtggtaaagcctttgcatataaaagtaatctccaaattcatgaaagaaaacacactggagggaaaccctctgaatgtaattaatgtagtaaagcttttgcatttcataatagtttccaaatacataaaagaacacatagtgagagaaaccctatgaatataaccaatgtggtaaaacatttccatatctcagtggtctccgcatttataacagaacacatagtggagagaaaccctatggatgtaa。gm20541在小鼠體內的具體作用機制尚不清楚，限制了其開發(fā)應用。迄今為止，還沒有針對gm20541基因的功能研究，其生物學功能不甚明了。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現，在目標動物如小鼠的視網膜前體細胞中敲除gm20541基因即沉默或敲減gm20541基因的表達，可以使得目標動物表現出視網膜色素變性性疾病相關的特征例如視桿細胞死亡并繼發(fā)視錐細胞死亡，主要表現為光感受器受損、變性，視網膜外核層逐漸變薄直至消失。裸鼠動物模型飼養(yǎng)上面是我們已構建成功的動物模型，我們還可以根據客戶實驗方案構建其它模型，具體要求請咨詢。

    指明方向。盡管現在基因組學、轉錄組、蛋白質組等組學已經取得了非凡的突破，但人類對于組學的整體性和復雜性認識還是很初級，也就比開始高明那么一點點，對橫亙在組學和個體之間的裂隙毫無辦法——這也是目前生物研究被黑的重要原因之一：由于目前還不存在什么生物根本性原理，很多研究還是得靠盲人摸象式的實驗、觀察和歸納。當年山中伸彌找到誘導分化細胞核重編程（也就是IPSc技術）的四個基因，可不是用理論算出來的，是大海撈針般地從成百上千個轉錄因子基因組合中篩選出來的。盡管以前的研究能有所幫助，但本質還是差別不大，這也是為什么分子生物學科研常常被類比成民工搬磚。明白了這個背景，你大概就能理解小鼠的意義。既然我們對復雜系統(tǒng)的架構原理毫無辦法，那我們不妨就建立一個標準模型，自上而下地研究問題。誠然，動物模型和人類差別巨大，小鼠、大鼠、兔、猴身上做的好好的實驗，放在人身上就不靈了（有時候，即使是針對某一個人群成功的實驗，換一個人群就不靈了，人類內部的多樣性都不容小覷）。但是，同在哺乳動物大家庭，大家的系統(tǒng)架構應該是差不多的，差別只在細節(jié)，問題已經從大海撈針變成了池塘撈針。為什么藥物會失效呢？如果是靶點有差異。

    輕微的接觸角膜的中心頂端。一通道正極接右眼，二通道正極接左眼。通過針管對雙眼滴生理鹽水，改善金環(huán)電極及角膜的接觸效果。保證兩個金環(huán)電極以相同的角度、方式接觸兩眼角膜中心正端的相同位置。5記錄示波信號確認無誤后，關閉暗紅光?？梢韵葒L試記錄一下暗適應光強為·s/m2的erg檢測，確認一下信號的質量：如果雙眼的振幅出現了與預期不同的較大差異，建議再次檢查金環(huán)電極的安裝位置。然后依次記錄暗適應光強為·s/m2的信號。需要注意的是，完成暗適應·s/m2光強檢測后，系統(tǒng)將自動打開背景光。同樣的，需要打開定時器，光適應10-15分鐘，再記錄。6經過光適應后，依次記錄光適應·s/m2以及·s/m2光強下波形，記錄·s/m2光強下閃爍視網膜誘發(fā)電位。結果發(fā)現在4個月時，與ctrl(對照)小鼠比較，cko(gm20541基因敲除純合子小鼠)小鼠的a波和b波在暗適應和光適應條件下均明顯降低，表明gm20541敲除后導致視力受損(見圖5和圖6)。實施例4視網膜石蠟切片h&e染色：對4月齡小鼠的視網膜進行石蠟切片、蘇木精-伊紅染色法(h&e染色方法)染色，具體操作如下：1)快速取小鼠眼球組織，并置于固定液中固定24h；2)石蠟包埋，切片，厚度為4μm；3)切片常規(guī)用二甲苯脫蠟。心力衰竭(heart failure)簡稱心衰,是指由于心臟的收縮功能和(或)舒張功能發(fā)生障礙。

    微波爐中融化后制成1％的瓊脂糖膠。取10μlpcr產物于加樣孔中，120v恒壓瓊脂糖電泳15min.用凝膠成像系統(tǒng)成像。圖4中a上方是gm20541條件性敲除鑒定結果，wt表示野生型對照，條帶大小為223bp；het表示雜合子，有兩個條帶223bp和358bp；sixko表示純合子，條帶大小為358bp。圖4中a下方是six3－cre鑒定結果。six3－cre大小為200bp。根據圖4中a的結果，顯示所采用的鑒定方法可對新生小鼠的基因型進行有效鑒定。其中，gm20541基因敲除純合子小鼠即可作為視網膜色素變性疾病模型(后文用sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子)，并進行相關表型的驗證。(5)rt-pcr實驗分析six3-cre敲除小鼠視網膜中基因敲除效率驗證，方法如下：(a)分別分離野生型和突變型小鼠視網膜組織，置于，加入1mltrizol提取液，室溫20分鐘；(b)加入200μl氯仿，充分混勻，室溫靜置10分鐘；(c)將樣品置于4度離心機，10000轉離心15分鐘；(d)小心吸取上清液，加入等體積異丙醇，充分混勻，10000轉離心沉淀rna；(e)75％乙醇清洗析出的總rna，離心再次沉淀，然后晾干加入depc水溶解；(f)提取的總rna用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。SD大鼠腦缺血模型建立。江蘇皮下成瘤動物模型實驗室

由于大鼠面神經與人類相似,易于暴露.因此通過大鼠面神經損傷致癱的模型制作方法為研究者提供更多的思路。寧夏C57動物模型

    特發(fā)性肺纖維化（IPF）小鼠模型建立【方法】1、BALB/c小鼠麻醉，6-8周齡，體重20~25g，仰臥固定于實驗臺上，頸部去毛后酒精消毒，切開皮膚，逐層暴露氣管；2、將1mL注射器經兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管，回抽無阻力；3、注入博萊霉素（約4~5mg/kg）再向氣管內注入～3次，使藥物在肺部分布均勻；4、以大鼠身體長軸為中心，正反快速旋轉鼠板1～2分鐘。縫合皮膚，局部聚維酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止，室溫保持在24～25℃，待動物自然清醒后置籠內常規(guī)飼養(yǎng)。肺纖維化模型發(fā)展時間：2周可見肺系數(肺重/體重×100％)、羥脯氨酸含量明顯升高。顯微鏡下可見炎癥細胞浸潤，以淋巴細胞、單核吞噬細胞為主，并有肺泡壁增厚、成纖維細胞增生等Ⅱ級肺泡炎表現。4周可見肺間質內有大量散在綠染的膠原纖維，肺泡結構破壞，見有許多纖維細胞等Ⅲ級肺間質纖維化病變。大鼠模型病理組織學與病理生理學改變與人類肺間質纖維化相似。其病變早期表現為滲出性肺泡炎，炎癥細胞在病變處聚集增多。晚期為肺間質纖維化，間質細胞增生，基質膠原聚集取代正常的肺組織結構?！緳z測】組織病理切片HE染色。寧夏C57動物模型