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湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-03-04

Anti Flag COIP磁珠

產(chǎn)品價(jià)格


產(chǎn)品貨號
規(guī)格
價(jià)格
Beenbio -PR002-0.4
0.4 mL
1150 RMB
Beenbio -PR002-1
mL
1780 RMB
Beenbio -PR002-5
5 mL
6825 RMB


產(chǎn)品描述

BEENbio Anti Flag COIP磁珠在大小為1um的納米磁珠上供價(jià)結(jié)合了大量的小鼠Anti Flag單克隆抗體,與傳統(tǒng)的Anti Flag COIP瓊脂糖凝膠比較,抗體結(jié)合能力相同,背景更低,由于采用磁性分離,使得每次COIP可以節(jié)省40%的時(shí)間。


產(chǎn)品特性


項(xiàng)目
特性
抗體亞型
鼠源IgG1
抗體純化方法
Protein A 純化制備
適用范圍
免疫共沉淀(IP),Flag tag蛋白純化
推薦使用體積
COIP: 500μl 細(xì)胞裂解液 使用 10μL磁珠
融合蛋白結(jié)合容量
大于1.1 mg Flag tagged protein/mL 磁珠



儲(chǔ)存條件

4oC長期穩(wěn)定,


使用說明

磁珠的準(zhǔn)備

重懸Anti Flag 免疫磁珠,取10 μL加入到500 μL TBS,洗滌3次,分離磁珠,棄上清。

樣品的結(jié)合(binding)

在上述沉淀中加入500 μL細(xì)胞裂解液,室溫緩慢孵育2小時(shí)或者4°C條件下過夜,分離磁珠,棄上清。

結(jié)合過程中,磁珠可能會(huì)出現(xiàn)聚團(tuán)或呈片狀,屬于正常現(xiàn)象,不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

洗滌(washing):0.5 mL TBS緩沖液洗滌四次,每次5min,分離磁珠,棄上清。

洗脫(elution):上述所得沉淀中加 50 μL 1×蛋白上樣緩沖液,煮沸5 min,冷卻后分離磁珠,吸取上清液,進(jìn)行SDS-PAGE檢測。 基于免疫磁珠分散聚集狀態(tài)檢測病原體與Cancer癥標(biāo)志物。湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

羥基淀粉沉淀去除臍血紅細(xì)胞和免疫磁珠(MACS)陽性選擇,建立富集,分離臍血CD34+細(xì)胞的簡易實(shí)用方法,通過造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)分析其在細(xì)胞因子作用下的增殖潛能,觀察羥基淀粉沉淀對造血細(xì)胞增殖功能的影響.方法:采用羥基淀粉沉淀和改進(jìn)的MACS富集,分離臍血CD34+細(xì)胞,以甲纖半固體造血細(xì)胞培養(yǎng)法觀察其粒-單系細(xì)胞(CFU-GM)和紅系爆式集落(BFU-E)的數(shù)量和特性.結(jié)果:臍血分離前,CD34+細(xì)胞純度為1.5%~3%,MACS分離后其純度可達(dá)85%,羥基淀粉沉淀和MACS分離可達(dá)91%;CD34+造血祖細(xì)胞培養(yǎng)有明顯的增殖,采用IL-3,IL-6,SCF,GM-CSF,EPO等細(xì)胞因子組合擴(kuò)增培養(yǎng)9~14d,CD34+細(xì)胞在液體培養(yǎng)中有明顯擴(kuò)增,MACS分離后CD34+細(xì)胞總數(shù)增加39倍,羥基淀粉沉淀和MACS分離可增加45倍.結(jié)論:應(yīng)用羥基淀粉沉淀和改進(jìn)的MACS系統(tǒng)可有效富集,分離臍血CD34+細(xì)胞,羥基淀粉沉淀對CD34+細(xì)胞的富集,分離無影響;臍血細(xì)胞分離后作造血祖細(xì)胞培養(yǎng),可產(chǎn)生豐富的CFU-GM和BFU-E,說明羥基淀粉沉淀分離的CD34+細(xì)胞的增殖功能優(yōu)于MACS分離CD34+細(xì)胞的增殖功能.黑龍江protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商免疫磁珠法富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究進(jìn)展。

COIP常見問題及對策

1:如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?

磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關(guān),請確 認(rèn)抗體的類型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低,可以通過增加抗體與磁珠的孵育時(shí)間( 30~120min)、提高結(jié)合緩沖液的pH值(8~9)及降低離子強(qiáng)度( 25~100mM NaCl)等方法提高親和效率。

2:如何提高磁珠在免疫沉淀反應(yīng)中的特異性?

可以先將抗體與樣品進(jìn)行孵育,形成抗體-抗原復(fù)合物,再用 Protein A/G磁珠捕獲復(fù)合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結(jié)合效 率,并降低磁珠與樣品接觸的時(shí)間,從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對 于蛋白質(zhì)/核酸共沉淀或染色質(zhì)免疫共沉淀也推薦使用此法。

免疫磁珠分離法純化抗血清的實(shí)驗(yàn)條件,并與A蛋白親和層析法比較純化效果,以求得到一種簡便,快速,高效的純化IgG方法.結(jié)果表明:從5只新西蘭兔獲得210 mL試管凝集效價(jià)高達(dá)1:5 120的兔抗鰻弧菌抗血清,磁珠與IgG結(jié)合10 min達(dá)到平衡,其比較大結(jié)合量為0.227 mg/mL;免疫磁珠分離法與A蛋白親和層析法得到的IgG純度都很高,經(jīng)過SDS-PAGE電泳都只得到25 ku和55 ku左右的兩條帶;免疫磁珠分離法得到的抗體ELISA效價(jià)高于A蛋白親和層析法;免疫磁珠分離法反應(yīng)所需時(shí)間(10 min)小于A蛋白親和層析法所需的20 min,其得率(11.5 mg/mL)也高于A蛋白親和層析法的10.25 mg/mL.免疫磁珠純化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立。

免疫磁珠法分離細(xì)胞是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合,在外加磁場中,通過抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場中,無該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁性,不在磁場中停留,從而使細(xì)胞得以分離。免疫磁珠應(yīng)用分為正選法和負(fù)選法:正選法-磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞負(fù)選法-磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞,游離于上清液的細(xì)胞為所需細(xì)胞,一般而言,負(fù)選法比正選法的磁珠用量大磁珠:大小在0.1-0.45mm包被了生產(chǎn)的高質(zhì)量單抗磁珠已為白細(xì)胞亞群的分選所優(yōu)化將包被了特異性單抗的BDIMag磁珠加入細(xì)胞懸液,磁珠特異性地與有相應(yīng)抗原的細(xì)胞亞群結(jié)合,通過分離得到的連有磁珠的細(xì)胞可直接用于功能試驗(yàn)和用流式細(xì)胞儀檢測。BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。黑龍江COIP免疫磁珠送貨上門

人骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨間充質(zhì)祖細(xì)胞的免疫磁珠分選和鑒定。湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

免疫磁珠法(MACS):免疫磁珠法是2O世紀(jì)80年代出現(xiàn)的技術(shù)方法。1983年Ugelstad提出將免疫磁珠用于細(xì)胞分選,1990年,Mihenyi建立了MACS。這一方法的**是在磁珠表面包被具免疫反應(yīng)性的抗體進(jìn)行抗原抗體反應(yīng),在細(xì)胞表面形成玫瑰花結(jié),這些結(jié)合了磁珠的細(xì)胞一旦置于強(qiáng)大的磁場下,就會(huì)與其他未被結(jié)合的細(xì)胞分群,具***順磁場的磁珠脫離磁場后立即消失磁性,這樣就可以篩選或去除所標(biāo)記的細(xì)胞,從而達(dá)到陽性或陰性選擇細(xì)胞的目的。這一技術(shù)已經(jīng)***運(yùn)用于細(xì)胞及分子生物學(xué),分離基因、靶細(xì)胞及造血干細(xì)胞等。其分離效果得到了免疫熒光、PCR、FISH及FACS等方法的確認(rèn)。免疫磁珠可以有效地分選細(xì)胞,從而決定了這一方法在神經(jīng)干細(xì)胞分選中應(yīng)用的技術(shù)可行性。湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

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標(biāo)簽: 免疫磁珠