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血清是指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用。血清的主要成分:血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異(胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)比較高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分比較少)。畜禽采集血分離血清是疫病監(jiān)測、檢測、診斷和評估免疫效果的一項前提性工作。河北馬血清批發(fā)
避免產(chǎn)生沉淀物1、解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃,實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。2、解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生3、請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。5、若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。海淀區(qū)馬血清哪家好可以使血清分離快,分離血清多不易受外界溫度的影響。
佐劑由于不同個體對同一抗原的反應(yīng)性不同,而且不同抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)的能力也有強有弱,因此常常在注射抗原的同時,加入能增強抗原的抗原性物質(zhì),以刺激機體產(chǎn)生較強的免疫反應(yīng),這種物質(zhì)稱為免疫佐劑。佐劑除了延長抗原在體內(nèi)的存留時間,增加抗原刺激作用外,更主要的是,它能刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng),使參與免疫反應(yīng)的免疫活性細胞增多,促進T細胞與B細胞的相互作用,從而增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的產(chǎn)生。常用的佐劑是福氏佐劑(Freundadjuvant),其成分通常是羊毛脂1份、石臘油5份羊毛脂與石臘油的比例,視需要可調(diào)整為1:2~9(V/V),這是不完全福氏佐劑,在每毫升不完全佐劑加入1~20mg卡介苗就成為完全佐劑。
血清的種類與類型根據(jù)培養(yǎng)的細胞類型不同,我們要選擇合適的血清類型。常見的血清類型如:特級胎牛血清、胚胎干細胞特用胎牛血清、間充質(zhì)干細胞特用胎牛血清等,還有新西蘭、澳洲來源的胎牛血清。此外,還有一些特殊加工工藝的血清如:四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)胎牛血清、低IgG胎牛血清、去外泌體胎牛血清、透析胎牛血清、碳吸附胎牛血清、去脂胎牛血清等。血清的解凍條件建議血清的解凍比較好方式為:-20℃冰柜到4℃冰箱融化,充分過夜解凍。不推薦-20℃冰柜到37℃水浴融化,會因溫度改變較大,導(dǎo)致蛋白析出,產(chǎn)生大量沉淀。解凍時,可將血清無菌分裝至50ml離心管中。部分細胞原代提取時會使用20%血清,大部分細胞正常培養(yǎng)時會使用5%~10%的血清濃度。
在進行營養(yǎng)成分優(yōu)化和標記特定成分進行研究的實驗中,需要去除某些特定的背景成分,常用的去除方法有碳吸附,使用活性碳和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lipophilic)物質(zhì)。活性炭能夠結(jié)合脂溶性分子,通過碳吸附可降低血清中許多***及生長因子的濃度,如雌二醇、皮質(zhì)醇、皮質(zhì)酮、孕酮、B類維生素、睪酮及T3、T4、前列腺素等。該血清適用于上述一些分子可能干擾實驗結(jié)果的實驗中,對于那些需要這些分子的細胞培養(yǎng),也可能降低細胞生長性能。適用于:培養(yǎng)干細胞、原代細胞、神經(jīng)細胞、人類細胞、人類骨髓細胞、白血病細胞、人類胚肺成纖維細胞、人類腦神經(jīng)細胞和瘤細胞等細胞。動物血清供應(yīng)細胞生計和增殖所必需的生長調(diào)理因子。蘇州羊血清廠家直銷
在一些情況下,中和毒性物質(zhì)維護細胞不受損害。河北馬血清批發(fā)
何謂熱滅活一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應(yīng)有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和煥活。有必要做熱滅活嗎?實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會明顯的增多,這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,像是"小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。購買的時候注意詢問廠家是否是已滅清。河北馬血清批發(fā)
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