為什么說熒光壽命成像FLIM相比于熒光強度成像更有優(yōu)勢?通過熒光強度成像可以獲得熒光分子的空間分布,較為直接和簡便,但是當(dāng)熒光分子具有相似的頻譜特性,或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時,依賴強度進(jìn)行成像的方案便無法準(zhǔn)確反映信息。與基于光強的成像方式不同,熒光壽命成像FLIM適用于測量熒光分子環(huán)境的變化,或是測量分子的運動情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無關(guān),且不受影響光強的光散射或是光吸收影響,可以精確測量熒光淬滅過程,對生物分子微環(huán)境進(jìn)行定量測量。熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像能夠?qū)Σ煌N類或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對比度。北京紅外熒光壽命成像哪家便宜
熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細(xì)胞等有效分離。熒光團(tuán)在光譜上非常相似(max 580 vs 573)無法分離,但它們在熒光壽命上差異明顯。作為生物傳感器,如評價藥物/理化條件對細(xì)胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍,實現(xiàn)可相互驗證的多維度樣品成像。實現(xiàn)真正的生物動力學(xué)分析和功能成像。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。天津紅外熒光壽命成像制造熒光壽命成像技術(shù)是如何應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)中的?
熒光壽命成像可以在體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息之外,還能夠靈敏地反應(yīng)熒光基團(tuán)生化特性以及周圍微環(huán)境的變化情況。將熒光壽命成像與共聚焦成像技術(shù)結(jié)合起來,實現(xiàn)人體三維熒光壽命成像,進(jìn)一步實現(xiàn)人體三維功能成像奠定基礎(chǔ),有潛力應(yīng)用于瘤識別,病變診斷等領(lǐng)域。熒光壽命是熒光基團(tuán)在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時間不同,大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點對點的時間相關(guān)單光子計數(shù)(TCSPC),但由于過去檢測硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展,在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘柌杉臒晒鈮勖上癯蔀榭赡堋?/p>
熒光壽命成像和生物發(fā)光的不同之處:產(chǎn)生光子的原理不同,類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣,生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上,都是機體中特定的細(xì)胞或材料發(fā)出光子,被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像,但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過程和機制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點:都需要對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像,就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。熒光壽命(FLT)是熒光團(tuán)在發(fā)射光子并返回基態(tài)之前花費在激發(fā)態(tài)的時間。根據(jù)熒光基團(tuán)的不同,F(xiàn)LT可以從皮秒到數(shù)百納秒不等。熒光壽命成像技術(shù)可顯示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。
熒光壽命成像具有什么優(yōu)勢?熒光壽命成像的優(yōu)勢:通過熒光強度成像可以獲得熒光分子的空間分布,較為直接和簡便,但是當(dāng)熒光分子具有相似的頻譜特性,或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時,依賴強度進(jìn)行成像的方案便無法準(zhǔn)確反映信息。與基于光強的成像方式不同,F(xiàn)LIM成像適用于測量熒光分子環(huán)境的變化,或是測量分子的運動情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無關(guān),且不受影響光強的光散射或是光吸收影響,可以精確測量熒光淬滅過程,對生物分子微環(huán)境進(jìn)行定量測量。熒光壽命成像不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實現(xiàn)深度解析測量。北京紅外熒光壽命成像哪家便宜
熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度的優(yōu)點。北京紅外熒光壽命成像哪家便宜
熒光壽命成像有什么作用?熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。時間域測量方法涉及用短光脈沖照射樣品(比色皿、細(xì)胞或組織),然后隨時間測量發(fā)射強度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測方法可用于壽命測量,其中時間相關(guān)單光子計數(shù)(TCSPC)可實現(xiàn)簡單的數(shù)據(jù)收集和增強的定量光子計數(shù)。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調(diào)制。在該方法中,發(fā)射發(fā)生在與入射光相同的頻率處,并且隨著激發(fā)光兼有相位延遲和振幅的變化(解調(diào))。壽命測量不需要波長比率探針來提供眾多分析物的定量測定。壽命法通過使用光譜位移探針擴(kuò)展了分析物濃度范圍的靈敏度。北京紅外熒光壽命成像哪家便宜
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