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熒光壽命成像是熒光基團(tuán)在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時(shí)間的量度。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時(shí)間不同,大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時(shí)間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)(TCSPC),但由于過去檢測硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展,在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn):不受染料濃度的影響,無論染色或免疫熒光的效率高或低,熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù),這意味著更少的實(shí)驗(yàn)數(shù)量和重復(fù)性更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。不受光漂白的影響,熒光發(fā)射時(shí)間不受激發(fā)光強(qiáng)度的影響,因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。熒光壽命成像的優(yōu)勢是什么?江蘇開放式熒光壽命成像生產(chǎn)
熒光壽命成像技術(shù)是怎么運(yùn)作的?通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命??娠@示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測到的光子數(shù))。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,F(xiàn)LIM-FRET為內(nèi)部參照—這一特點(diǎn)減少了基于強(qiáng)度測量FRET時(shí)的很多缺點(diǎn)。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對(duì)其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達(dá)水平)具有普遍的不變性。使用基于強(qiáng)度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設(shè)。通常情況并非如此。杭州動(dòng)物熒光壽命成像哪個(gè)牌子好熒光成像技術(shù)可以用于手術(shù)中神經(jīng)保護(hù)。
熒光壽命成像分析是什么?熒光壽命是用于幾種生物測定的穩(wěn)健參數(shù)。它有可能替代傳統(tǒng)的測量技術(shù),如吸收法、冷光法或熒光強(qiáng)度法。熒光團(tuán)物理化學(xué)環(huán)境的任何變化都會(huì)導(dǎo)致熒光壽命的改變。可通過各種機(jī)制來研發(fā)基于壽命的分析,例如簡單的結(jié)合測定,涉及到兩個(gè)組分的結(jié)合(一個(gè)被熒光標(biāo)記)而引起FLT的變化。另一種機(jī)制是猝滅釋放型測定,涉及大量過量存在的猝滅物質(zhì),其具有低而有限的熒光。一旦熒光化合物被釋放(通過酶促反應(yīng)或與互補(bǔ)DNA結(jié)合),系統(tǒng)的壽命就會(huì)改變。FLT可與FRET(熒光共振能量轉(zhuǎn)移)分析結(jié)合用于能量轉(zhuǎn)移效率測量。
熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn),它在監(jiān)控?zé)晒饧{米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個(gè)優(yōu)勢:(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細(xì)胞分化導(dǎo)致的納米顆粒的稀釋等對(duì)測量的影響;(2)很多常見的發(fā)光材料的熒光壽命都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于細(xì)胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對(duì)熒光成像的干擾;(3)發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關(guān),熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應(yīng)材料的化學(xué)穩(wěn)定性。熒光壽命成像是一種重要的熒光顯微鏡技術(shù)。熒光壽命成像可用于多種生物應(yīng)用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動(dòng)力治理、DNA芯片分析等。
熒光壽命成像的優(yōu)勢:通過熒光壽命來進(jìn)行成像,只需要拍攝一次就完成圖像采集,不但減少了成像時(shí)間,而且降低了激光對(duì)樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進(jìn)行參數(shù)調(diào)節(jié)。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。熒光壽命是熒光分子在激發(fā)態(tài)停留的時(shí)間,這個(gè)時(shí)間可以反映熒光分子的內(nèi)在屬性和所處的微環(huán)境,是一個(gè)很有用的工具。以往,熒光壽命的測量和計(jì)算是件非常復(fù)雜和耗時(shí)的工作,只有少數(shù)專業(yè)的科學(xué)家關(guān)注和使用該工具。傳統(tǒng)的多色成像實(shí)驗(yàn)根據(jù)光譜差異來設(shè)計(jì),會(huì)有串色等限制,而且需要多次采集圖像,會(huì)造成樣品的光損傷。熒光壽命成像具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn)。天津多色熒光壽命成像怎么用
生物發(fā)光與熒光成像相同點(diǎn)是都需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。江蘇開放式熒光壽命成像生產(chǎn)
熒光壽命成像技術(shù)用于表征DNA壓縮和基因活性。研究團(tuán)隊(duì)發(fā)展了熒光壽命成像技術(shù)(FLIM),表征DNA壓縮的動(dòng)態(tài)過程,克服了以往方法的局限性。研究團(tuán)隊(duì)提出了兩種精確測量DNA壓縮程度的FLIM分析方法。第一種方法基于加入DNA的熒光探針的熒光壽命與其局部微環(huán)境折射率之間的逆二次方關(guān)系,熒光探針的壽命隨DNA壓縮密度而變化,從而可表征DNA壓縮程度。第二種方法是將熒光標(biāo)記的核苷酸整合到DNA鏈中,通過一種叫做熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的技術(shù)獲得其熒光壽命值的變化,從而反映出DNA的壓縮程度的動(dòng)態(tài)變化過程。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果證明,兩種FLIM分析方法都可以成功表征DNA壓縮的動(dòng)態(tài)過程。江蘇開放式熒光壽命成像生產(chǎn)
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