熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時(shí)間，處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境，通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光壽命成像技術(shù)有兩種：時(shí)間域和頻率域。（1）時(shí)域FLIM：需要脈沖光源，所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM（熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM）。（2）頻域FLIM：需要一個(gè)相位調(diào)制的光源，有用LED調(diào)制的， FLIM對很多研究都有幫助，以下為熒光壽命成像FLIM的應(yīng)用：1）細(xì)胞體自身熒光壽命分析；2）自身熒光相對熒光標(biāo)記的有效區(qū)分；3）具有相同頻譜性質(zhì)的不同熒光標(biāo)記的區(qū)分；4）活細(xì)胞內(nèi)水介質(zhì)的PH值測量；5）局部氧氣濃度測量；6）活細(xì)胞內(nèi)鈣濃度測量；7）時(shí)間分辨Forster共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）：納米級(jí)尺度上的遠(yuǎn)程測量，環(huán)境敏感的FRET探針定量測量。熒光壽命成像可以運(yùn)用在哪些地方？北京紅外熒光壽命成像要多少錢

影響熒光壽命成像測量的因素有哪些？溫度影響：一般說來，熒光隨溫度升高而強(qiáng)度減弱，溫度升高1℃，熒光強(qiáng)度下降1～10%不等。測定時(shí)，溫度必須保持恒定。PH值影響：PH 值影響物質(zhì)的熒光，應(yīng)選擇較佳PH制備樣品。光分解對熒光測定的影響： 熒光物質(zhì)吸收紫外可見光后，發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。因此，熒光分析要采用高靈敏度的檢測器，而不是用增強(qiáng)光源來提高靈敏度。測定時(shí)，用較窄的激發(fā)光部分的狹縫，以減弱激發(fā)光。同時(shí)，用較寬的發(fā)射狹縫引導(dǎo)熒光。熒光分析應(yīng)盡量在暗環(huán)境中進(jìn)行。熒光壽命成像這種技術(shù)相對較新，涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布?；瘜W(xué)熒光壽命成像價(jià)格熒光壽命通常來講是一定的，不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響。

生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點(diǎn)：產(chǎn)生光子的原理不同，類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣，生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上，都是機(jī)體中特定的細(xì)胞或材料發(fā)出光子，被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像，但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過程和機(jī)制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點(diǎn)：都需要對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像，就像一個(gè)人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。除此之外，生物發(fā)光和熒光壽命成像都需要對目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，讓細(xì)胞產(chǎn)生熒光素酶或者熒光蛋白。

熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點(diǎn)對點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC），但由于過去檢測硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。該圖形視圖使任何觀察者都能快速區(qū)分和分離FLIM圖像中的不同壽命種群。相量FLIM分布的解釋很簡單。因?yàn)槊總€(gè)物種都有特定的相量，所以可以在單個(gè)像素內(nèi)解析多個(gè)分子物種。熒光壽命成像能夠?qū)Σ煌N類或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對比度。

熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括：用于樣品分離，如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細(xì)胞等有效分離。熒光團(tuán)在光譜上非常相似（max 580 vs 573）無法分離，但它們在熒光壽命上差異明顯。作為生物傳感器，如評價(jià)藥物/理化條件對細(xì)胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍，實(shí)現(xiàn)可相互驗(yàn)證的多維度樣品成像。實(shí)現(xiàn)真正的生物動(dòng)力學(xué)分析和功能成像。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題，對生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。熒光壽命成像被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。三維熒光壽命成像操作步驟

熒光壽命成像主要可以用于樣品分離。北京紅外熒光壽命成像要多少錢

熒光壽命成像技術(shù)可以實(shí)時(shí)監(jiān)控納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性，利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實(shí)現(xiàn)可以實(shí)時(shí)監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性。熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn)，它在監(jiān)控?zé)晒饧{米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個(gè)優(yōu)勢：（1）熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響，可排除納米材料的胞吐及細(xì)胞分化導(dǎo)致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響；（2）很多常見的發(fā)光材料的熒光壽命都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于細(xì)胞的自熒光的壽命，很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾；（3）發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關(guān)，熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應(yīng)材料的化學(xué)穩(wěn)定性。北京紅外熒光壽命成像要多少錢

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