熒光壽命成像可以在體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息之外，還能夠靈敏地反應(yīng)熒光基團(tuán)生化特性以及周圍微環(huán)境的變化情況。將熒光壽命成像與共聚焦成像技術(shù)結(jié)合起來，實(shí)現(xiàn)人體三維熒光壽命成像，進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)人體三維功能成像奠定基礎(chǔ)，有潛力應(yīng)用于瘤識(shí)別，病變診斷等領(lǐng)域。熒光壽命是熒光基團(tuán)在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時(shí)間的量度。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時(shí)間不同，大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時(shí)間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC），但由于過去檢測硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像不但可在樣品表面，還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測量。天津多色熒光壽命成像哪里有

為什么說熒光壽命成像FLIM相比于熒光強(qiáng)度成像更有優(yōu)勢？通過熒光強(qiáng)度成像可以獲得熒光分子的空間分布，較為直接和簡便，但是當(dāng)熒光分子具有相似的頻譜特性，或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時(shí)，依賴強(qiáng)度進(jìn)行成像的方案便無法準(zhǔn)確反映信息。與基于光強(qiáng)的成像方式不同，熒光壽命成像FLIM適用于測量熒光分子環(huán)境的變化，或是測量分子的運(yùn)動(dòng)情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無關(guān)，且不受影響光強(qiáng)的光散射或是光吸收影響，可以精確測量熒光淬滅過程，對(duì)生物分子微環(huán)境進(jìn)行定量測量。熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。珠海三維熒光壽命成像操作步驟熒光壽命成像技術(shù)是如何應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)中的？

熒光壽命成像技術(shù)是如何應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)中的？隨著近年來對(duì)蛋白及分子功能研究的不斷深入，科研工作者除對(duì)多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外，對(duì)熒光壽命成像的需求也逐漸增加，而熒光壽命成像能提供除熒光強(qiáng)度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息，可用于分子間相互作用（FRET）、分子所處微環(huán)境的離子濃度（如Ca2+、pH）及細(xì)胞代謝水平的改變等測量，并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發(fā)熒光，還可以結(jié)合熒光相關(guān)光譜對(duì)單分子實(shí)現(xiàn)熒光壽命相關(guān)光譜FLCS的測量。熒光壽命成像擴(kuò)展了傳統(tǒng)熒光成像的維度，是功能成像的理想工具，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。

為什么說熒光壽命成像技術(shù)是先進(jìn)的？熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度（光子數(shù)）和光子壽命的空間分布，具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。通過雙光子激發(fā)（結(jié)合飛秒脈沖和共焦顯微鏡）可以直接檢測熒光和時(shí)間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術(shù)，無需解剖或?qū)ｉT制造分層樣品，不但可在樣品表面，還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計(jì)優(yōu)化。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境。

分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間，因此，測量熒光壽命成像需要極快響應(yīng)時(shí)間的探測器。如今主要存在兩類方案：一是時(shí)域測量，由一束窄脈沖將熒光分子激發(fā)至較高能態(tài)S1，接著測量熒光的發(fā)射幾率隨時(shí)間的變化。典型的時(shí)域測量方法有TCSPC和時(shí)間門（TG）兩種。TCSPC利用快速秒表測量激發(fā)脈沖與探測熒光之間的時(shí)間差。使用高重復(fù)脈沖激發(fā)光激發(fā)樣品，在每一個(gè)脈沖周期內(nèi)，較多激發(fā)熒光分子發(fā)出一個(gè)光子，然后記錄光子出現(xiàn)的時(shí)刻，并在該時(shí)刻記錄一個(gè)光子，再下一個(gè)脈沖周期內(nèi)也是相同的情況，經(jīng)過多次計(jì)數(shù)可以得到熒光光子隨時(shí)間的分布曲線。相似的，TG則探測不同時(shí)間窗口內(nèi)的熒光強(qiáng)度，通過曲線擬合得到熒光壽命。二是頻域測量，對(duì)連續(xù)激發(fā)光進(jìn)行振幅調(diào)制后，分子發(fā)出的熒光強(qiáng)度也會(huì)受到振幅調(diào)制，兩個(gè)調(diào)制信號(hào)之間存在與熒光壽命相關(guān)的相位差，因此可以測量該相位差計(jì)算熒光壽命。熒光壽命成像一般不受諸如激光或熒光強(qiáng)度擾動(dòng)、染料的光漂白以及其他有礙熒光強(qiáng)度的因素的影響。江蘇動(dòng)物熒光壽命成像哪里有

熒光壽命成像的優(yōu)勢是什么？天津多色熒光壽命成像哪里有

熒光壽命顯微成像優(yōu)點(diǎn)：熒光壽命顯微成像（Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM）是熒光壽命測量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合，熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強(qiáng)度和光漂白影響等優(yōu)點(diǎn)。在過去的十年中，光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，共同促進(jìn)了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進(jìn)步。熒光壽命成像（FLIM）對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及調(diào)控，蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。天津多色熒光壽命成像哪里有

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