生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點(diǎn):產(chǎn)生光子的原理不同,類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣,生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上,都是機(jī)體中特定的細(xì)胞或材料發(fā)出光子,被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像,但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過程和機(jī)制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點(diǎn):都需要對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像,就像一個(gè)人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。除此之外,生物發(fā)光和熒光壽命成像都需要對目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記,讓細(xì)胞產(chǎn)生熒光素酶或者熒光蛋白。熒光壽命通常來講是一定的,不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響。遼寧顯微熒光壽命成像制造
熒光壽命成像如何理解?熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(shù)(Time-Correlated Single Photon Counting)實(shí)現(xiàn)。系統(tǒng)采用超短脈寬激光器作為激發(fā)光源,通過光路耦合器,將激光引入顯微光路。激光通過物鏡聚焦照射樣品池,利用光子探測裝置(PMT)對熒光信號進(jìn)行探測,再用TCSPC計(jì)數(shù)器對每一個(gè)光子進(jìn)行計(jì)數(shù),并將其放入一個(gè)對應(yīng)的時(shí)間窗口,經(jīng)過一定時(shí)間的統(tǒng)計(jì)疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復(fù)以后,不同的時(shí)間通道累積下來的光子數(shù)目不同。以光子數(shù)對時(shí)間作圖可得到熒光衰減曲線。實(shí)現(xiàn)從百ps-ns-us的瞬態(tài)測試。綜上所述由于TCSPC系統(tǒng),一個(gè)激光脈沖只采集一個(gè)光子信號,所以激光器的重復(fù)頻率決定了系統(tǒng)的數(shù)據(jù)采集速度。重頻越高,采集速度越快,數(shù)據(jù)信噪比越好。廣東動(dòng)物熒光壽命成像哪里買影響熒光壽命成像測量的因素:高濃度樣品,高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。
熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合,已普遍應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和其他領(lǐng)域。FLIM具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強(qiáng)度和光漂白影響等優(yōu)點(diǎn)。在過去的十年中,光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展,共同促進(jìn)了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進(jìn)步。盡管經(jīng)過幾十年的技術(shù)發(fā)展,F(xiàn)LIM技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中仍然面臨著一些挑戰(zhàn),例如:FLIM的成像分辨率也會(huì)受到光衍射的限制,因此,在實(shí)際應(yīng)用中,我們經(jīng)常需要在成像速度、圖像質(zhì)量和微環(huán)境壽命精度之間進(jìn)行權(quán)衡。
熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時(shí)間,處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境,通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光壽命成像技術(shù)有兩種:時(shí)間域和頻率域。(1)時(shí)域FLIM:需要脈沖光源,所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM(熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM)。(2)頻域FLIM:需要一個(gè)相位調(diào)制的光源,有用LED調(diào)制的, FLIM對很多研究都有幫助,以下為熒光壽命成像FLIM的應(yīng)用:1)細(xì)胞體自身熒光壽命分析;2)自身熒光相對熒光標(biāo)記的有效區(qū)分;3)具有相同頻譜性質(zhì)的不同熒光標(biāo)記的區(qū)分;4)活細(xì)胞內(nèi)水介質(zhì)的PH值測量;5)局部氧氣濃度測量;6)活細(xì)胞內(nèi)鈣濃度測量;7)時(shí)間分辨Forster共振能量轉(zhuǎn)移(FRET):納米級尺度上的遠(yuǎn)程測量,環(huán)境敏感的FRET探針定量測量。熒光的特性包含有:熒光激發(fā)和發(fā)射光譜、熒光強(qiáng)度、量子效率、熒光壽命等。
影響熒光壽命成像測量的因素有哪些?溫度影響:一般說來,熒光隨溫度升高而強(qiáng)度減弱,溫度升高1℃,熒光強(qiáng)度下降1~10%不等。測定時(shí),溫度必須保持恒定。PH值影響:PH 值影響物質(zhì)的熒光,應(yīng)選擇較佳PH制備樣品。光分解對熒光測定的影響: 熒光物質(zhì)吸收紫外可見光后,發(fā)生光化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。因此,熒光分析要采用高靈敏度的檢測器,而不是用增強(qiáng)光源來提高靈敏度。測定時(shí),用較窄的激發(fā)光部分的狹縫,以減弱激發(fā)光。同時(shí),用較寬的發(fā)射狹縫引導(dǎo)熒光。熒光分析應(yīng)盡量在暗環(huán)境中進(jìn)行。熒光壽命成像這種技術(shù)相對較新,涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。光壽命成像顯微技術(shù)已在生命科學(xué)領(lǐng)域中得到了普遍的應(yīng)用。重慶三維熒光壽命成像售價(jià)
熒光壽命成像主要可以用于樣品分離。遼寧顯微熒光壽命成像制造
熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn):在數(shù)據(jù)處理上,由于曲線擬合迭代過程的需求,計(jì)算成本較其他成像方案更高。在成像原理上,熒光壽命受多種外界因素影響,這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等,很難對這些參數(shù)控制變量,使得測量熒光壽命存在交叉干擾問題。此外,與普通光學(xué)顯微技術(shù)類似,介質(zhì)光散射影響成像信噪比及空間分辨率,成像深度受到限制。FLIM已經(jīng)在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數(shù)據(jù)處理算法等方面得到了較快的發(fā)展,這也使得熒光壽命成像FLIM在對細(xì)胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測發(fā)揮出不可替代的作用。遼寧顯微熒光壽命成像制造
波銘科儀,2013-06-03正式啟動(dòng),成立了拉曼光譜儀,電動(dòng)位移臺(tái),激光器,光電探測器等幾大市場布局,應(yīng)對行業(yè)變化,順應(yīng)市場趨勢發(fā)展,在創(chuàng)新中尋求突破,進(jìn)而提升愛特蒙特的市場競爭力,把握市場機(jī)遇,推動(dòng)儀器儀表產(chǎn)業(yè)的進(jìn)步。是具有一定實(shí)力的儀器儀表企業(yè)之一,主要提供拉曼光譜儀,電動(dòng)位移臺(tái),激光器,光電探測器等領(lǐng)域內(nèi)的產(chǎn)品或服務(wù)。我們強(qiáng)化內(nèi)部資源整合與業(yè)務(wù)協(xié)同,致力于拉曼光譜儀,電動(dòng)位移臺(tái),激光器,光電探測器等實(shí)現(xiàn)一體化,建立了成熟的拉曼光譜儀,電動(dòng)位移臺(tái),激光器,光電探測器運(yùn)營及風(fēng)險(xiǎn)管理體系,累積了豐富的儀器儀表行業(yè)管理經(jīng)驗(yàn),擁有一大批專業(yè)人才。值得一提的是,波銘科儀致力于為用戶帶去更為定向、專業(yè)的儀器儀表一體化解決方案,在有效降低用戶成本的同時(shí),更能憑借科學(xué)的技術(shù)讓用戶極大限度地挖掘愛特蒙特的應(yīng)用潛能。