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深圳生物熒光壽命成像報價

來源: 發(fā)布時間:2023-03-06

熒光壽命成像在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用:自發(fā)熒光FLIM被普遍應(yīng)用于非標(biāo)記生物成像領(lǐng)域。所謂自發(fā)熒光,即生物細(xì)胞本身便包含熒光分子,稱為內(nèi)源性熒光分子團(tuán)。FLIM通過對自發(fā)熒光分子團(tuán)(如NAD(P)H)熒光壽命的考察,可以實現(xiàn)細(xì)胞代謝的監(jiān)測。這種方案無需人為對樣品加入熒光試劑便可以發(fā)射熒光,有效減少了熒光染料對樣品的毒性、熒光分子與樣品的非特異性結(jié)合及染料對生理性能的干擾影響。外源分子探針FLIM借助于外部熒光染料的注入以產(chǎn)生熒光。如今,為了利用FLIM對物理條件(包括粘度、溫度、酸度和氧化作用)的敏感性,已經(jīng)開發(fā)出了許多適用于體內(nèi)和體外應(yīng)用的光學(xué)探針。熒光壽命成像中的熒光壽命是什么意思?深圳生物熒光壽命成像報價

分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間,因此,測量熒光壽命成像需要極快響應(yīng)時間的探測器。如今主要存在兩類方案:一是時域測量,由一束窄脈沖將熒光分子激發(fā)至較高能態(tài)S1,接著測量熒光的發(fā)射幾率隨時間的變化。典型的時域測量方法有TCSPC和時間門(TG)兩種。TCSPC利用快速秒表測量激發(fā)脈沖與探測熒光之間的時間差。使用高重復(fù)脈沖激發(fā)光激發(fā)樣品,在每一個脈沖周期內(nèi),較多激發(fā)熒光分子發(fā)出一個光子,然后記錄光子出現(xiàn)的時刻,并在該時刻記錄一個光子,再下一個脈沖周期內(nèi)也是相同的情況,經(jīng)過多次計數(shù)可以得到熒光光子隨時間的分布曲線。相似的,TG則探測不同時間窗口內(nèi)的熒光強度,通過曲線擬合得到熒光壽命。二是頻域測量,對連續(xù)激發(fā)光進(jìn)行振幅調(diào)制后,分子發(fā)出的熒光強度也會受到振幅調(diào)制,兩個調(diào)制信號之間存在與熒光壽命相關(guān)的相位差,因此可以測量該相位差計算熒光壽命。浙江分子熒光壽命成像有哪些熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒有參與FRET的分子數(shù)量。

熒光壽命成像的優(yōu)勢:通過熒光壽命來進(jìn)行成像,只需要拍攝一次就完成圖像采集,不但減少了成像時間,而且降低了激光對樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進(jìn)行參數(shù)調(diào)節(jié)。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。熒光壽命是熒光分子在激發(fā)態(tài)停留的時間,這個時間可以反映熒光分子的內(nèi)在屬性和所處的微環(huán)境,是一個很有用的工具。以往,熒光壽命的測量和計算是件非常復(fù)雜和耗時的工作,只有少數(shù)專業(yè)的科學(xué)家關(guān)注和使用該工具。傳統(tǒng)的多色成像實驗根據(jù)光譜差異來設(shè)計,會有串色等限制,而且需要多次采集圖像,會造成樣品的光損傷。

熒光壽命成像:熒光壽命是熒光團(tuán)在發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前保持其激發(fā)態(tài)的平均時間長度。這取決于熒光團(tuán)的分子組成和納米環(huán)境。熒光壽命成像將壽命測量與成像相結(jié)合:對每個圖像像素以測得的熒光壽命進(jìn)行顏色編碼,產(chǎn)生額外的圖像反差。因此,熒光壽命成像可以提供關(guān)于熒光分子空間分布的信息和有關(guān)其生化狀態(tài)或納米環(huán)境的信息。有很多技術(shù)可以在顯微鏡環(huán)境中檢測熒光壽命。常見的的是基于供體(受體光漂白,F(xiàn)RET AB)或受體(敏化發(fā)射,F(xiàn)RET SE)熒光強度的技術(shù)。熒光成像技術(shù)可以用于手術(shù)中神經(jīng)保護(hù)。

熒光壽命成像的優(yōu)勢是什么?熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優(yōu)點;不需要考慮跳色的影響,從而免去了計算和去除跳色雜質(zhì)信號的麻煩;去除跳色雜質(zhì)的準(zhǔn)確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設(shè)計和控制、以及跳色信號估算的算法,這些因素使得通過穩(wěn)態(tài)光強度測量熒光壽命成像的精確度在很多時候受到質(zhì)疑。穩(wěn)態(tài)光強度的熒光壽命成像測量很容易受熒光標(biāo)記光漂白或是激發(fā)光散射背景的影響,而這些因素對FLIM-FRET的測量影響相對較低。熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒有參與FRET的分子數(shù)量,這樣深入的定量分析是穩(wěn)態(tài)光強度方法做不到的。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點對點的時間相關(guān)單光子計數(shù)。佛山紅外熒光壽命成像報價

熒光壽命成像可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。深圳生物熒光壽命成像報價

熒光壽命成像和熒光光盤有什么區(qū)別?與熒光光譜一樣,熒光壽命也是熒光物質(zhì)的一種內(nèi)在特有性質(zhì),不受熒光物質(zhì)濃度、激發(fā)光強度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強度影響因素影響的條件下,在納米分辨率水平對蛋白互作進(jìn)行研究,或者通過 FRET 探針研究分子環(huán)境變化,更重要的是其測量數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性高、易重復(fù)。通過熒光壽命成像還可以對樣本所處的微環(huán)境進(jìn)行檢測、對樣品組份進(jìn)行分離等等。在傳統(tǒng)的熒光強度和熒光光譜兩個維度的基礎(chǔ)上,又增加了熒光壽命這一新的成像維度,大幅度拓展了該系統(tǒng)的應(yīng)用范圍。深圳生物熒光壽命成像報價

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