影響熒光壽命成像測量的因素:高濃度樣品的影響:1)當(dāng)激發(fā)光照射高濃度樣品時,在激發(fā)光入口附近產(chǎn)生熒光,但這些熒光并不能進入熒光檢測器。2)高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。3)熒光的再吸收:即熒光光譜的短波長端和激發(fā)光譜的長波長端如果相互重疊,則發(fā)生熒光再吸收。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。散射光的影響: 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法:先用短的激發(fā)光激發(fā),檢出溶液的拉曼峰,然后進行熒光光譜校正。因為熒光光譜不隨激發(fā)光波長的改變而改變,而拉曼光卻隨之改變。熒光壽命成像的優(yōu)勢是什么?天津紅外熒光壽命成像批發(fā)
熒光壽命成像的優(yōu)勢是什么?熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優(yōu)點;不需要考慮跳色的影響,從而免去了計算和去除跳色雜質(zhì)信號的麻煩;去除跳色雜質(zhì)的準確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設(shè)計和控制、以及跳色信號估算的算法,這些因素使得通過穩(wěn)態(tài)光強度測量熒光壽命成像的精確度在很多時候受到質(zhì)疑。穩(wěn)態(tài)光強度的熒光壽命成像測量很容易受熒光標記光漂白或是激發(fā)光散射背景的影響,而這些因素對FLIM-FRET的測量影響相對較低。熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒有參與FRET的分子數(shù)量,這樣深入的定量分析是穩(wěn)態(tài)光強度方法做不到的。江蘇分子熒光壽命成像哪家靠譜影響熒光壽命成像測量的因素有哪些?
熒光壽命成像與傳統(tǒng)的使用熒光強度和光譜信息作為鑒別組織異常的成像方式相比,壽命成像提供了更多的生化診斷信息。熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。另外,采用多光子激發(fā)可顯著提高組織體的成像深度,如對人體皮膚自體熒光進行多光子激發(fā)熒光壽命成像,成像深度達200 um,組織體的熒光壽命分布揭示了細胞代謝狀態(tài)的變化,可用于對皮膚病的診斷。對腔體中瘤的早期臨床診斷,已開發(fā)出具有實時及壽命分辨功能的內(nèi)窺鏡,并對離體膀胱樣品進行測試,得到了黃素分子的自體熒光壽命圖像。
分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間,因此,測量熒光壽命成像需要極快響應(yīng)時間的探測器。如今主要存在兩類方案:一是時域測量,由一束窄脈沖將熒光分子激發(fā)至較高能態(tài)S1,接著測量熒光的發(fā)射幾率隨時間的變化。典型的時域測量方法有TCSPC和時間門(TG)兩種。TCSPC利用快速秒表測量激發(fā)脈沖與探測熒光之間的時間差。使用高重復(fù)脈沖激發(fā)光激發(fā)樣品,在每一個脈沖周期內(nèi),較多激發(fā)熒光分子發(fā)出一個光子,然后記錄光子出現(xiàn)的時刻,并在該時刻記錄一個光子,再下一個脈沖周期內(nèi)也是相同的情況,經(jīng)過多次計數(shù)可以得到熒光光子隨時間的分布曲線。相似的,TG則探測不同時間窗口內(nèi)的熒光強度,通過曲線擬合得到熒光壽命。二是頻域測量,對連續(xù)激發(fā)光進行振幅調(diào)制后,分子發(fā)出的熒光強度也會受到振幅調(diào)制,兩個調(diào)制信號之間存在與熒光壽命相關(guān)的相位差,因此可以測量該相位差計算熒光壽命。熒光壽命成像可用于對皮膚病的診斷,對腔體病癥早期的臨床診斷。
熒光壽命成像如何理解?熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(shù)(Time-Correlated Single Photon Counting)實現(xiàn)。系統(tǒng)采用超短脈寬激光器作為激發(fā)光源,通過光路耦合器,將激光引入顯微光路。激光通過物鏡聚焦照射樣品池,利用光子探測裝置(PMT)對熒光信號進行探測,再用TCSPC計數(shù)器對每一個光子進行計數(shù),并將其放入一個對應(yīng)的時間窗口,經(jīng)過一定時間的統(tǒng)計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復(fù)以后,不同的時間通道累積下來的光子數(shù)目不同。以光子數(shù)對時間作圖可得到熒光衰減曲線。實現(xiàn)從百ps-ns-us的瞬態(tài)測試。綜上所述由于TCSPC系統(tǒng),一個激光脈沖只采集一個光子信號,所以激光器的重復(fù)頻率決定了系統(tǒng)的數(shù)據(jù)采集速度。重頻越高,采集速度越快,數(shù)據(jù)信噪比越好。熒光壽命成像擁有超快的激光技術(shù),高速、高靈敏度探測技術(shù)。安徽分子熒光壽命成像
熒光壽命成像能夠?qū)Σ煌N類或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對比度。天津紅外熒光壽命成像批發(fā)
熒光壽命成像有什么作用?熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。時間域測量方法涉及用短光脈沖照射樣品(比色皿、細胞或組織),然后隨時間測量發(fā)射強度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測方法可用于壽命測量,其中時間相關(guān)單光子計數(shù)(TCSPC)可實現(xiàn)簡單的數(shù)據(jù)收集和增強的定量光子計數(shù)。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調(diào)制。在該方法中,發(fā)射發(fā)生在與入射光相同的頻率處,并且隨著激發(fā)光兼有相位延遲和振幅的變化(解調(diào))。壽命測量不需要波長比率探針來提供眾多分析物的定量測定。壽命法通過使用光譜位移探針擴展了分析物濃度范圍的靈敏度。天津紅外熒光壽命成像批發(fā)
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