熒光壽命成像這種技術(shù)相對(duì)較新，涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。它基于熒光團(tuán)的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實(shí)。它可以用于無(wú)法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測(cè)量分子環(huán)境參數(shù)，通過(guò)熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)進(jìn)行的蛋白質(zhì)相互作用，并可以通過(guò)細(xì)胞和組織的自發(fā)熒光來(lái)測(cè)量其代謝狀態(tài)。分子環(huán)境參數(shù)可以通過(guò)因熒光淬滅或熒光團(tuán)的構(gòu)象變化而引起的壽命變化來(lái)測(cè)量。FLIM可用于多種生物應(yīng)用，包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動(dòng)力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。熒光壽命成像是熒光團(tuán)在發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前保持其激發(fā)態(tài)的平均時(shí)間長(zhǎng)度。重慶顯微熒光壽命成像原理

熒光壽命成像是熒光基團(tuán)在通過(guò)發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長(zhǎng)時(shí)間的量度。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時(shí)間不同，大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時(shí)間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測(cè)經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC），但由于過(guò)去檢測(cè)硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒(méi)有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn)：不受染料濃度的影響，無(wú)論染色或免疫熒光的效率高或低，熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù)，這意味著更少的實(shí)驗(yàn)數(shù)量和重復(fù)性更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。不受光漂白的影響，熒光發(fā)射時(shí)間不受激發(fā)光強(qiáng)度的影響，因此不存在光漂白問(wèn)題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。杭州三維熒光壽命成像價(jià)格表熒光成像在疾病診斷，藥物分布和代謝評(píng)估以及血管生物成像中得到了普遍的應(yīng)用。

影響熒光壽命成像測(cè)量的因素有哪些？溫度影響：一般說(shuō)來(lái)，熒光隨溫度升高而強(qiáng)度減弱，溫度升高1℃，熒光強(qiáng)度下降1～10%不等。測(cè)定時(shí)，溫度必須保持恒定。PH值影響：PH 值影響物質(zhì)的熒光，應(yīng)選擇較佳PH制備樣品。光分解對(duì)熒光測(cè)定的影響： 熒光物質(zhì)吸收紫外可見(jiàn)光后，發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。因此，熒光分析要采用高靈敏度的檢測(cè)器，而不是用增強(qiáng)光源來(lái)提高靈敏度。測(cè)定時(shí)，用較窄的激發(fā)光部分的狹縫，以減弱激發(fā)光。同時(shí)，用較寬的發(fā)射狹縫引導(dǎo)熒光。熒光分析應(yīng)盡量在暗環(huán)境中進(jìn)行。熒光壽命成像這種技術(shù)相對(duì)較新，涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。

熒光成像技術(shù)涉及精確測(cè)量已添加到組織中的自然熒光分子或熒光標(biāo)簽的熒光衰減率或壽命。由于壽命取決于分子環(huán)境的特性，如溫度和pH，以及其與周?chē)肿拥南嗷プ饔?，因此可利用熒光成像技術(shù)獲得有關(guān)分子性質(zhì)及其微環(huán)境的信息。通常，使用激光掃描共聚焦顯微鏡進(jìn)行熒光成像技術(shù)，通過(guò)掃描激光束穿過(guò)熒光樣品以形成圖像，從而實(shí)現(xiàn)高分辨率。為了在宏觀尺度上獲得熒光成像的信息，研究人員開(kāi)發(fā)了一種共焦的宏觀系統(tǒng)，該系統(tǒng)結(jié)合了激光和非常短的脈沖，利用只有皮秒的長(zhǎng)度和非常靈敏的檢測(cè)器來(lái)檢測(cè)熒光。該系統(tǒng)還包括計(jì)算光子的電子器件，并繪制它們相對(duì)于激光脈沖和樣品上激光束位置的時(shí)間分布。熒光壽命成像可用于多種生物應(yīng)用，包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動(dòng)力治理、皮膚成像等。

熒光壽命檢測(cè)經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC），但由于過(guò)去檢測(cè)硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒(méi)有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。該圖形視圖使任何觀察者都能快速區(qū)分和分離FLIM圖像中的不同壽命種群。相量FLIM分布的解釋很簡(jiǎn)單。因?yàn)槊總€(gè)物種都有特定的相量，所以可以在單個(gè)像素內(nèi)解析多個(gè)分子物種。熒光壽命成像可以用于無(wú)法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。浙江分子熒光壽命成像

為什么說(shuō)熒光壽命成像FLIM相比于熒光強(qiáng)度成像更有優(yōu)勢(shì)？重慶顯微熒光壽命成像原理

熒光壽命成像和熒光光盤(pán)有什么區(qū)別？與熒光光譜一樣，熒光壽命也是熒光物質(zhì)的一種內(nèi)在特有性質(zhì)，不受熒光物質(zhì)濃度、激發(fā)光強(qiáng)度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強(qiáng)度影響因素影響的條件下，在納米分辨率水平對(duì)蛋白互作進(jìn)行研究，或者通過(guò) FRET 探針研究分子環(huán)境變化，更重要的是其測(cè)量數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性高、易重復(fù)。通過(guò)熒光壽命成像還可以對(duì)樣本所處的微環(huán)境進(jìn)行檢測(cè)、對(duì)樣品組份進(jìn)行分離等等。在傳統(tǒng)的熒光強(qiáng)度和熒光光譜兩個(gè)維度的基礎(chǔ)上，又增加了熒光壽命這一新的成像維度，大幅度拓展了該系統(tǒng)的應(yīng)用范圍。重慶顯微熒光壽命成像原理

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