熒光壽命成像技術能夠實時監(jiān)控納米顆粒在細胞內的穩(wěn)定性。FLIM不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測生物生物樣品等優(yōu)點，它在監(jiān)控熒光納米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個優(yōu)勢：（1）熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響，可排除納米材料的胞吐及細胞分化導致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響；（2）很多常見的發(fā)光材料的熒光壽命都遠遠大于細胞的自熒光的壽命，很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾；（3）發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關，熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應材料的化學穩(wěn)定性?；谏鲜鲈?，他們利用FLIM技術系統(tǒng)考察了半導體量子點和金納米簇在活的細胞（HeLa）里72小時內的穩(wěn)定性，以及不同的表面配體對這一過程的影響。影響熒光壽命成像測量的因素：高濃度樣品，高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。北京動物熒光壽命成像費用

為什么說熒光壽命成像FLIM相比于熒光強度成像更有優(yōu)勢？通過熒光強度成像可以獲得熒光分子的空間分布，較為直接和簡便，但是當熒光分子具有相似的頻譜特性，或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時，依賴強度進行成像的方案便無法準確反映信息。與基于光強的成像方式不同，熒光壽命成像FLIM適用于測量熒光分子環(huán)境的變化，或是測量分子的運動情況。其結果與熒光分子濃度無關，且不受影響光強的光散射或是光吸收影響，可以精確測量熒光淬滅過程，對生物分子微環(huán)境進行定量測量。熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。遼寧顯微熒光壽命成像好不好熒光壽命成像特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料的原理探究和設計優(yōu)化。

分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間，因此，測量熒光壽命成像需要極快響應時間的探測器。如今主要存在兩類方案：一是時域測量，由一束窄脈沖將熒光分子激發(fā)至較高能態(tài)S1，接著測量熒光的發(fā)射幾率隨時間的變化。典型的時域測量方法有TCSPC和時間門（TG）兩種。TCSPC利用快速秒表測量激發(fā)脈沖與探測熒光之間的時間差。使用高重復脈沖激發(fā)光激發(fā)樣品，在每一個脈沖周期內，較多激發(fā)熒光分子發(fā)出一個光子，然后記錄光子出現(xiàn)的時刻，并在該時刻記錄一個光子，再下一個脈沖周期內也是相同的情況，經過多次計數(shù)可以得到熒光光子隨時間的分布曲線。相似的，TG則探測不同時間窗口內的熒光強度，通過曲線擬合得到熒光壽命。二是頻域測量，對連續(xù)激發(fā)光進行振幅調制后，分子發(fā)出的熒光強度也會受到振幅調制，兩個調制信號之間存在與熒光壽命相關的相位差，因此可以測量該相位差計算熒光壽命。

影響熒光壽命成像測量的因素有哪些？溫度影響：一般說來，熒光隨溫度升高而強度減弱，溫度升高1℃，熒光強度下降1～10%不等。測定時，溫度必須保持恒定。PH值影響：PH 值影響物質的熒光，應選擇較佳PH制備樣品。光分解對熒光測定的影響： 熒光物質吸收紫外可見光后，發(fā)生光化學反應，導致熒光強度下降。因此，熒光分析要采用高靈敏度的檢測器，而不是用增強光源來提高靈敏度。測定時，用較窄的激發(fā)光部分的狹縫，以減弱激發(fā)光。同時，用較寬的發(fā)射狹縫引導熒光。熒光分析應盡量在暗環(huán)境中進行。熒光壽命成像這種技術相對較新，涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。

熒光壽命成像可以干什么？熒光壽命成像圖像中每一個像素點在phasor圖上都有一個對應的點。因此我們可以獲取每個像素點的壽命信息，也可以獲知每一壽命所對應的圖像區(qū)域。熒光壽命成像可以提供熒光強度（光子數(shù)）和光子壽命的空間分布，具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發(fā)（結合飛秒脈沖和共焦顯微鏡）可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術，無需解剖或專門制造分層樣品，不但可在樣品表面，還可在樣品表面以下實現(xiàn)深度解析測量。特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復合材料以及其相關的原理探究和設計優(yōu)化。熒光壽命對依賴于熒光團結構的內部因素敏感。北京動物熒光壽命成像費用

熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響，可排除納米材料的胞吐分化導致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響。北京動物熒光壽命成像費用

熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時間，處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境，通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光壽命成像技術有兩種：時間域和頻率域。（1）時域FLIM：需要脈沖光源，所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM（熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM）。（2）頻域FLIM：需要一個相位調制的光源，有用LED調制的， FLIM對很多研究都有幫助，以下為熒光壽命成像FLIM的應用：1）細胞體自身熒光壽命分析；2）自身熒光相對熒光標記的有效區(qū)分；3）具有相同頻譜性質的不同熒光標記的區(qū)分；4）活細胞內水介質的PH值測量；5）局部氧氣濃度測量；6）活細胞內鈣濃度測量；7）時間分辨Forster共振能量轉移（FRET）：納米級尺度上的遠程測量，環(huán)境敏感的FRET探針定量測量。北京動物熒光壽命成像費用

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