為什么說(shuō)熒光壽命成像FLIM相比于熒光強(qiáng)度成像更有優(yōu)勢(shì)?通過(guò)熒光強(qiáng)度成像可以獲得熒光分子的空間分布,較為直接和簡(jiǎn)便,但是當(dāng)熒光分子具有相似的頻譜特性,或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時(shí),依賴強(qiáng)度進(jìn)行成像的方案便無(wú)法準(zhǔn)確反映信息。與基于光強(qiáng)的成像方式不同,熒光壽命成像FLIM適用于測(cè)量熒光分子環(huán)境的變化,或是測(cè)量分子的運(yùn)動(dòng)情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無(wú)關(guān),且不受影響光強(qiáng)的光散射或是光吸收影響,可以精確測(cè)量熒光淬滅過(guò)程,對(duì)生物分子微環(huán)境進(jìn)行定量測(cè)量。熒光壽命成像可以用于無(wú)法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命是熒光基團(tuán)在通過(guò)發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長(zhǎng)時(shí)間的量度。珠海熒光壽命成像大概多少錢(qián)
熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時(shí)間,處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過(guò)程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境,通過(guò)對(duì)樣品熒光壽命的測(cè)量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光壽命成像技術(shù)有兩種:時(shí)間域和頻率域。(1)時(shí)域FLIM:需要脈沖光源,所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見(jiàn)FLIM(熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡(jiǎn)稱FLIM)。(2)頻域FLIM:需要一個(gè)相位調(diào)制的光源,有用LED調(diào)制的, FLIM對(duì)很多研究都有幫助,以下為熒光壽命成像FLIM的應(yīng)用:1)細(xì)胞體自身熒光壽命分析;2)自身熒光相對(duì)熒光標(biāo)記的有效區(qū)分;3)具有相同頻譜性質(zhì)的不同熒光標(biāo)記的區(qū)分;4)活細(xì)胞內(nèi)水介質(zhì)的PH值測(cè)量;5)局部氧氣濃度測(cè)量;6)活細(xì)胞內(nèi)鈣濃度測(cè)量;7)時(shí)間分辨Forster共振能量轉(zhuǎn)移(FRET):納米級(jí)尺度上的遠(yuǎn)程測(cè)量,環(huán)境敏感的FRET探針定量測(cè)量。杭州開(kāi)放式熒光壽命成像好不好熒光壽命顯微成像技術(shù)具有對(duì)生物大分子結(jié)構(gòu)、動(dòng)力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測(cè)量的能力。
熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn):在數(shù)據(jù)處理上,由于曲線擬合迭代過(guò)程的需求,計(jì)算成本較其他成像方案更高。在成像原理上,熒光壽命受多種外界因素影響,這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等,很難對(duì)這些參數(shù)控制變量,使得測(cè)量熒光壽命存在交叉干擾問(wèn)題。此外,與普通光學(xué)顯微技術(shù)類似,介質(zhì)光散射影響成像信噪比及空間分辨率,成像深度受到限制。FLIM已經(jīng)在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數(shù)據(jù)處理算法等方面得到了較快的發(fā)展,這也使得熒光壽命成像FLIM在對(duì)細(xì)胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測(cè)發(fā)揮出不可替代的作用。
熒光壽命成像的優(yōu)勢(shì)是什么?熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn);不需要考慮跳色的影響,從而免去了計(jì)算和去除跳色雜質(zhì)信號(hào)的麻煩;去除跳色雜質(zhì)的準(zhǔn)確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設(shè)計(jì)和控制、以及跳色信號(hào)估算的算法,這些因素使得通過(guò)穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度測(cè)量熒光壽命成像的精確度在很多時(shí)候受到質(zhì)疑。穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度的熒光壽命成像測(cè)量很容易受熒光標(biāo)記光漂白或是激發(fā)光散射背景的影響,而這些因素對(duì)FLIM-FRET的測(cè)量影響相對(duì)較低。熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒(méi)有參與FRET的分子數(shù)量,這樣深入的定量分析是穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度方法做不到的。熒光壽命成像系統(tǒng)是一種用于化學(xué)領(lǐng)域的分析儀器。
熒光壽命顯微成像技術(shù)具有對(duì)生物大分子結(jié)構(gòu)、動(dòng)力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測(cè)量的能力,因此其重要性日漸提升,被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光壽命,分子包含多個(gè)能態(tài)S0、S1、S2和三重態(tài)T1,每個(gè)能態(tài)都包含多個(gè)精細(xì)的能級(jí)。正常情況下,大部分電子處在較低能態(tài)即基態(tài)S0的較低能級(jí)上,當(dāng)分子被光束照射,會(huì)吸收光子能量,電子被激發(fā)到更高的能態(tài)S1或S2上,在S2能態(tài)上的電子只能存在很短暫的時(shí)間,便會(huì)通過(guò)內(nèi)轉(zhuǎn)換過(guò)程躍遷到S1上,而S1能態(tài)上的電子亦會(huì)在極短時(shí)間內(nèi)躍遷到S1的較低能級(jí)上,而這些電子會(huì)存在一段時(shí)間后通過(guò)震蕩弛豫輻射躍遷到基態(tài),這個(gè)過(guò)程會(huì)釋放一個(gè)光子,即熒光。市場(chǎng)上熒光壽命的測(cè)量方式可分為時(shí)域法和頻域法。杭州動(dòng)物熒光壽命成像好不好
熒光壽命成像可用于對(duì)皮膚病的診斷,對(duì)腔體病癥早期的臨床診斷。珠海熒光壽命成像大概多少錢(qián)
熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測(cè)人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn),它在監(jiān)控?zé)晒饧{米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個(gè)優(yōu)勢(shì):(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細(xì)胞分化導(dǎo)致的納米顆粒的稀釋等對(duì)測(cè)量的影響;(2)很多常見(jiàn)的發(fā)光材料的熒光壽命都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于細(xì)胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對(duì)熒光成像的干擾;(3)發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關(guān),熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應(yīng)材料的化學(xué)穩(wěn)定性。熒光壽命成像是一種重要的熒光顯微鏡技術(shù)。珠海熒光壽命成像大概多少錢(qián)
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