在基于時間相關(guān)單光子計數(shù)的熒光壽命成像實驗中，通過選用超快激光器可以優(yōu)化脈沖持續(xù)時間，單光子探測器和時間數(shù)字轉(zhuǎn)換器的時間抖動則成為制約時間分辨率的關(guān)鍵參數(shù)。熒光壽命成像可進(jìn)行高質(zhì)量的多色成像實驗或?qū)崿F(xiàn)STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應(yīng)用的熒光壽命測定技術(shù)。熒光壽命通常在ps～us量級，在如此短的時間量級上進(jìn)行測量，它是較為成熟準(zhǔn)確的測試手段。TCSPC的工作原理是使用一個同步信號源驅(qū)動激光器，出射光脈沖照射樣品池，在利用光子探測裝置（多為PMT）對熒光信號進(jìn)行探測，每一個光子計數(shù)信號在FT1010中都會落入一個對應(yīng)的時間窗口，經(jīng)過一定時間的統(tǒng)計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復(fù)以后，不同的時間通道累積下來的光子數(shù)目不同。熒光壽命成像擴(kuò)展了傳統(tǒng)熒光成像的維度，是功能成像的理想工具；天津植物熒光壽命成像哪里買

熒光壽命顯微成像技術(shù)具有對生物大分子結(jié)構(gòu)、動力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測量的能力，因此其重要性日漸提升，被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光壽命，分子包含多個能態(tài)S0、S1、S2和三重態(tài)T1，每個能態(tài)都包含多個精細(xì)的能級。正常情況下，大部分電子處在較低能態(tài)即基態(tài)S0的較低能級上，當(dāng)分子被光束照射，會吸收光子能量，電子被激發(fā)到更高的能態(tài)S1或S2上，在S2能態(tài)上的電子只能存在很短暫的時間，便會通過內(nèi)轉(zhuǎn)換過程躍遷到S1上，而S1能態(tài)上的電子亦會在極短時間內(nèi)躍遷到S1的較低能級上，而這些電子會存在一段時間后通過震蕩弛豫輻射躍遷到基態(tài)，這個過程會釋放一個光子，即熒光。天津植物熒光壽命成像哪里買影響熒光壽命成像測量的因素：高濃度樣品，高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。

影響熒光壽命成像測量的幾種因素：1．溫度影響：一般說來，熒光隨溫度升高而強(qiáng)度減弱，溫度升高1℃，熒光強(qiáng)度下降1～10%不等。測定時，溫度必須保持恒定。 2．PH值影響：PH 值影響物質(zhì)的熒光，應(yīng)選擇較佳PH制備樣品。 3．光分解對熒光測定的影響： 熒光物質(zhì)吸收紫外可見光后，發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。因此，熒光分析要采用高靈敏度的檢測器，而不是用增強(qiáng)光源來提高靈敏度。測定時，用較窄的激發(fā)光部分的狹縫，以減弱激發(fā)光。同時，用較寬的發(fā)射狹縫引導(dǎo)熒光。熒光分析應(yīng)盡量在暗環(huán)境中進(jìn)行。

熒光壽命成像（Fluorescence Lifetime Imaging ，F(xiàn)LIM)）是一種重要的熒光顯微鏡技術(shù)，通常用于研究生物分子間相互作用、細(xì)胞中的信號事件或區(qū)分光譜重疊的熒光團(tuán)。此外，F(xiàn)LIM 可以提供有關(guān)電信號變化、離子和氧含量、溫度、細(xì)胞或其環(huán)境中的 pH 值的定量信息。熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn)：不受染料濃度的影響，無論染色或免疫熒光的效率高或低，熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù)，這意味著更少的實驗數(shù)量和重復(fù)性更好的實驗結(jié)果。不受光漂白的影響，熒光發(fā)射時間不受激發(fā)光強(qiáng)度的影響，因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。熒光壽命顯微成像，可以定位不同的分子及濃度分布，在生物，材料，半導(dǎo)體領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價值。

紅外熒光壽命成像技術(shù)在生物多重檢測中的應(yīng)用。相比于熒光強(qiáng)度，熒光壽命的數(shù)值具有很好的穩(wěn)定性，不依賴于生物組織穿透深度。因此可以實現(xiàn)生物多重成像和量化診斷。該團(tuán)隊利用能量延遲方法并結(jié)合對發(fā)光離子濃度的調(diào)控，實現(xiàn)NIR-II區(qū)單一波長下熒光壽命三個量級以上的精確調(diào)節(jié)。將這種成像方法應(yīng)用于乳腺的精確診斷，其對標(biāo)志物的定量檢測結(jié)果與傳統(tǒng)的免疫印跡法和免疫組織化學(xué)法相比有很好的一致性。而相比于后兩者一次只能對一種標(biāo)志物進(jìn)行檢測，這種新的時間維度成像方法可以原位實現(xiàn)同時定量多個標(biāo)記物，并且減少了傳統(tǒng)檢測方法在組織切片的制作、處理以及評分過程中所導(dǎo)致結(jié)果的差異性。熒光壽命成像能夠?qū)Σ煌N類或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對比度。天津植物熒光壽命成像哪里買

熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。天津植物熒光壽命成像哪里買

熒光壽命成像技術(shù)用于表征DNA壓縮和基因活性。研究團(tuán)隊發(fā)展了熒光壽命成像技術(shù)（FLIM），表征DNA壓縮的動態(tài)過程，克服了以往方法的局限性。研究團(tuán)隊提出了兩種精確測量DNA壓縮程度的FLIM分析方法。第一種方法基于加入DNA的熒光探針的熒光壽命與其局部微環(huán)境折射率之間的逆二次方關(guān)系，熒光探針的壽命隨DNA壓縮密度而變化，從而可表征DNA壓縮程度。第二種方法是將熒光標(biāo)記的核苷酸整合到DNA鏈中，通過一種叫做熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）的技術(shù)獲得其熒光壽命值的變化，從而反映出DNA的壓縮程度的動態(tài)變化過程。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果證明，兩種FLIM分析方法都可以成功表征DNA壓縮的動態(tài)過程。天津植物熒光壽命成像哪里買

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