在基于時間相關(guān)單光子計數(shù)的熒光壽命成像實驗中,通過選用超快激光器可以優(yōu)化脈沖持續(xù)時間,單光子探測器和時間數(shù)字轉(zhuǎn)換器的時間抖動則成為制約時間分辨率的關(guān)鍵參數(shù)。熒光壽命成像可進(jìn)行高質(zhì)量的多色成像實驗或?qū)崿F(xiàn)STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應(yīng)用的熒光壽命測定技術(shù)。熒光壽命通常在ps~us量級,在如此短的時間量級上進(jìn)行測量,它是較為成熟準(zhǔn)確的測試手段。TCSPC的工作原理是使用一個同步信號源驅(qū)動激光器,出射光脈沖照射樣品池,在利用光子探測裝置(多為PMT)對熒光信號進(jìn)行探測,每一個光子計數(shù)信號在FT1010中都會落入一個對應(yīng)的時間窗口,經(jīng)過一定時間的統(tǒng)計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復(fù)以后,不同的時間通道累積下來的光子數(shù)目不同。熒光壽命成像技術(shù)有兩種:時間域和頻率域。遼寧動物熒光壽命成像供貨商
影響熒光壽命成像測量的因素有哪些?溫度影響:一般說來,熒光隨溫度升高而強(qiáng)度減弱,溫度升高1℃,熒光強(qiáng)度下降1~10%不等。測定時,溫度必須保持恒定。PH值影響:PH 值影響物質(zhì)的熒光,應(yīng)選擇較佳PH制備樣品。光分解對熒光測定的影響: 熒光物質(zhì)吸收紫外可見光后,發(fā)生光化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。因此,熒光分析要采用高靈敏度的檢測器,而不是用增強(qiáng)光源來提高靈敏度。測定時,用較窄的激發(fā)光部分的狹縫,以減弱激發(fā)光。同時,用較寬的發(fā)射狹縫引導(dǎo)熒光。熒光分析應(yīng)盡量在暗環(huán)境中進(jìn)行。熒光壽命成像這種技術(shù)相對較新,涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。湖南單分子熒光壽命成像有哪些熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點;
熒光壽命成像和生物發(fā)光的異同點是什么?生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點:產(chǎn)生光子的原理不同,類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣,生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上,都是機(jī)體中特定的細(xì)胞或材料發(fā)出光子,被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像,但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過程和機(jī)制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點:都需要對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像,就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。除此之外,生物發(fā)光和熒光壽命成像都需要對目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記,讓細(xì)胞產(chǎn)生熒光素酶或者熒光蛋白。
熒光壽命成像技術(shù)用于表征DNA壓縮和基因活性。研究團(tuán)隊發(fā)展了熒光壽命成像技術(shù)(FLIM),表征DNA壓縮的動態(tài)過程,克服了以往方法的局限性。研究團(tuán)隊提出了兩種精確測量DNA壓縮程度的FLIM分析方法。第一種方法基于加入DNA的熒光探針的熒光壽命與其局部微環(huán)境折射率之間的逆二次方關(guān)系,熒光探針的壽命隨DNA壓縮密度而變化,從而可表征DNA壓縮程度。第二種方法是將熒光標(biāo)記的核苷酸整合到DNA鏈中,通過一種叫做熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的技術(shù)獲得其熒光壽命值的變化,從而反映出DNA的壓縮程度的動態(tài)變化過程。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果證明,兩種FLIM分析方法都可以成功表征DNA壓縮的動態(tài)過程。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題,對生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。
熒光壽命成像在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷應(yīng)用中的許多場合都對多光譜分辨提出特殊要求,如在FRET測量中,要求能同時測量供體和受體的熒光強(qiáng)度隨時間的衰減,多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段.目前,基于門控像增強(qiáng)器的多光譜寬場FLIM 技術(shù)一次只能獲得至多兩個譜段的熒光壽命圖像,而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低,這些都限制了其應(yīng)用范圍.目前的一個研究方向是,發(fā)展光譜分辨率高、成像速度快、價格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術(shù)。熒光壽命成像具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點。湖南單分子熒光壽命成像有哪些
熒光壽命成像技術(shù)是通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。遼寧動物熒光壽命成像供貨商
熒光壽命成像(FLI):這種技術(shù)相對較新,涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。它基于熒光團(tuán)的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實。它可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環(huán)境參數(shù),通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)進(jìn)行的蛋白質(zhì)相互作用,并可以通過細(xì)胞和組織的自發(fā)熒光來測量其代謝狀態(tài)。分子環(huán)境參數(shù)可以通過因熒光淬滅或熒光團(tuán)的構(gòu)象變化而引起的壽命變化來測量。FLIM可用于多種生物應(yīng)用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。遼寧動物熒光壽命成像供貨商
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