市場上熒光壽命的測量方式可分為時(shí)域法和頻域法，兩者在本質(zhì)上是相通的，測量精度相近，頻域技術(shù)是時(shí)域法的傅里葉變換的延伸。時(shí)域和頻域技術(shù)在各種顯微壽命成像平臺中都有應(yīng)用，時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)方法（TCSPC )是常見的時(shí)域技術(shù)，而新興的數(shù)字頻域技術(shù)（FastFLIM? )則取代了傳統(tǒng)的模擬頻域技術(shù)，憑借其獨(dú)恃的優(yōu)勢成為應(yīng)用廣的頻域技術(shù)。熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(shù)（Time-Correlated Single Photon Counting）實(shí)現(xiàn)。由于TCSPC系統(tǒng)，一個(gè)激光脈沖只采集一個(gè)光子信號，所以激光器的重復(fù)頻率決定了系統(tǒng)的數(shù)據(jù)采集速度。重頻越高，采集速度越快，數(shù)據(jù)信噪比越好。測量熒光壽命需要極快響應(yīng)時(shí)間的探測器。江蘇紅外熒光壽命成像怎么操作

熒光壽命成像技術(shù)及其在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用：熒光分子的壽命就像熒光分子的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜一樣是熒光分子的固有特性，隨著近年來對蛋白及分子功能研究的不斷深入，科研工作者除對多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外，對熒光壽命成像的需求也逐漸增加，而熒光壽命成像能提供除熒光強(qiáng)度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息，可用于分子間相互作用（FRET）、分子所處微環(huán)境的離子濃度（如Ca2+、pH）及細(xì)胞代謝水平的改變等測量，并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發(fā)熒光，還可以結(jié)合熒光相關(guān)光譜對單分子實(shí)現(xiàn)熒光壽命相關(guān)光譜FLCS的測量。熒光壽命成像擴(kuò)展了傳統(tǒng)熒光成像的維度，是功能成像的理想工具，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。杭州熒光壽命成像哪家便宜熒光壽命成像技術(shù)是一種在顯微尺度下展現(xiàn)熒光壽命空間分布的技術(shù)。

在種類繁多的顯微技術(shù)中，熒光壽命顯微成像技術(shù)（FLIM）具有對生物大分子結(jié)構(gòu)、動力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測量的能力，因此其重要性日漸提升，被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光的特性包含有：熒光激發(fā)和發(fā)射光譜、熒光強(qiáng)度、量子效率、熒光壽命等,其中，熒光壽命是指熒光分子在激發(fā)態(tài)上存在的平均時(shí)間（納秒量級）。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間，因此，測量熒光壽命需要極快響應(yīng)時(shí)間的探測器。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題，對生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。

熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點(diǎn)對點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC），但由于過去檢測硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘柌杉臒晒鈮勖上癯蔀榭赡堋晒鈮勖上裉峁┝藟勖植嫉亩S圖形視圖。該圖形視圖使任何觀察者都能快速區(qū)分和分離FLIM圖像中的不同壽命種群。相量FLIM分布的解釋很簡單。因?yàn)槊總€(gè)物種都有特定的相量，所以可以在單個(gè)像素內(nèi)解析多個(gè)分子物種。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境。

分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間，因此，測量熒光壽命成像需要極快響應(yīng)時(shí)間的探測器。如今主要存在兩類方案：一是時(shí)域測量，由一束窄脈沖將熒光分子激發(fā)至較高能態(tài)S1，接著測量熒光的發(fā)射幾率隨時(shí)間的變化。典型的時(shí)域測量方法有TCSPC和時(shí)間門（TG）兩種。TCSPC利用快速秒表測量激發(fā)脈沖與探測熒光之間的時(shí)間差。使用高重復(fù)脈沖激發(fā)光激發(fā)樣品，在每一個(gè)脈沖周期內(nèi)，較多激發(fā)熒光分子發(fā)出一個(gè)光子，然后記錄光子出現(xiàn)的時(shí)刻，并在該時(shí)刻記錄一個(gè)光子，再下一個(gè)脈沖周期內(nèi)也是相同的情況，經(jīng)過多次計(jì)數(shù)可以得到熒光光子隨時(shí)間的分布曲線。相似的，TG則探測不同時(shí)間窗口內(nèi)的熒光強(qiáng)度，通過曲線擬合得到熒光壽命。二是頻域測量，對連續(xù)激發(fā)光進(jìn)行振幅調(diào)制后，分子發(fā)出的熒光強(qiáng)度也會受到振幅調(diào)制，兩個(gè)調(diào)制信號之間存在與熒光壽命相關(guān)的相位差，因此可以測量該相位差計(jì)算熒光壽命。熒光壽命成像技術(shù)是通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。江蘇紅外熒光壽命成像怎么操作

熒光壽命成像使用簡單，方便快捷，不需要進(jìn)行參數(shù)調(diào)節(jié)。江蘇紅外熒光壽命成像怎么操作

用于流場診斷的快速熒光壽命成像系統(tǒng)及方法：熒光壽命成像具有不受染料濃度、不受光漂白、不受樣本厚度和光源噪聲的影響等諸多優(yōu)點(diǎn)，通過這一技術(shù)手段可以深入地進(jìn)行功能性測量，獲取分子構(gòu)象、分子微環(huán)境變化等信息，研究分子間的相互作用。熒光共振能量轉(zhuǎn)移是一種非輻射的，距離依賴的由供體熒光基團(tuán)傳遞能量至受體熒光基團(tuán)的過程，普遍用于蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象變化，蛋白質(zhì)分子間的相互作用，分子間距離的測量等研究。熒光壽命是熒光分子停留在激發(fā)態(tài)的時(shí)間，是熒光分子的固有性質(zhì)，同熒光強(qiáng)度成像相比。江蘇紅外熒光壽命成像怎么操作

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