熒光壽命成像在生物醫(yī)學研究和臨床診斷應(yīng)用中的許多場合都對多光譜分辨提出特殊要求,如在FRET測量中,要求能同時測量供體和受體的熒光強度隨時間的衰減,多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段.目前,基于門控像增強器的多光譜寬場FLIM 技術(shù)一次只能獲得至多兩個譜段的熒光壽命圖像,而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低,這些都限制了其應(yīng)用范圍.目前的一個研究方向是,發(fā)展光譜分辨率高、成像速度快、價格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術(shù)。熒光壽命成像通常用于研究生物分子間相互作用、細胞中的信號事件或區(qū)分光譜重疊的熒光團。北京動物熒光壽命成像大概多少錢
熒光壽命是熒光基團在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團激發(fā)態(tài)停時間不同,大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點對點的時間相關(guān)單光子計數(shù)(TCSPC),但由于過去檢測硬件的局限和復雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學研究。隨著技術(shù)的發(fā)展,在顯微鏡視野內(nèi)進行超快速全像素熒光壽命信號采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。該圖形視圖使任何觀察者都能快速區(qū)分和分離FLIM圖像中的不同壽命種群。相量FLIM分布的解釋很簡單。因為每個物種都有特定的相量,所以可以在單個像素內(nèi)解析多個分子物種。相量圖如何生成?當使用時間分辨單光子計數(shù)(TCSPC)系統(tǒng)獲取數(shù)據(jù)時,相量FLIM分布是從傅立葉變換中得出的(Digman等,2008)。圖像中的每個像素對應(yīng)于相量圖中的一個點。北京動物熒光壽命成像大概多少錢熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環(huán)境變化。
用于流場診斷的快速熒光壽命成像系統(tǒng)及方法:熒光壽命成像具有不受染料濃度、不受光漂白、不受樣本厚度和光源噪聲的影響等諸多優(yōu)點,通過這一技術(shù)手段可以深入地進行功能性測量,獲取分子構(gòu)象、分子微環(huán)境變化等信息,研究分子間的相互作用。熒光共振能量轉(zhuǎn)移是一種非輻射的,距離依賴的由供體熒光基團傳遞能量至受體熒光基團的過程,普遍用于蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象變化,蛋白質(zhì)分子間的相互作用,分子間距離的測量等研究。熒光壽命是熒光分子停留在激發(fā)態(tài)的時間,是熒光分子的固有性質(zhì),同熒光強度成像相比。
熒光壽命成像技術(shù)實時監(jiān)控納米顆粒在細胞內(nèi)的穩(wěn)定性:利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實現(xiàn)可以實時監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細胞內(nèi)的穩(wěn)定性。熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點,它在監(jiān)控熒光納米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個優(yōu)勢:(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細胞分化導致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響;(2)很多常見的發(fā)光材料的熒光壽命都遠遠大于細胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾;(3)發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關(guān),熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應(yīng)材料的化學穩(wěn)定性。熒光壽命成像有潛力應(yīng)用于瘤識別,病變診斷等領(lǐng)域。
熒光壽命成像和生物發(fā)光的不同之處:產(chǎn)生光子的原理不同,類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣,生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上,都是機體中特定的細胞或材料發(fā)出光子,被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像,但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過程和機制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點:都需要對細胞進行標記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像,就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。熒光壽命(FLT)是熒光團在發(fā)射光子并返回基態(tài)之前花費在激發(fā)態(tài)的時間。根據(jù)熒光基團的不同,F(xiàn)LT可以從皮秒到數(shù)百納秒不等。影響熒光壽命成像測量的因素有哪些?福建紅外熒光壽命成像哪里有
熒光壽命成像的應(yīng)用領(lǐng)域有哪些?北京動物熒光壽命成像大概多少錢
熒光壽命成像是熒光基團在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團激發(fā)態(tài)停時間不同,大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點對點的時間相關(guān)單光子計數(shù)(TCSPC),但由于過去檢測硬件的局限和復雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學研究。隨著技術(shù)的發(fā)展,在顯微鏡視野內(nèi)進行超快速全像素熒光壽命信號采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優(yōu)點:不受染料濃度的影響,無論染色或免疫熒光的效率高或低,熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù),這意味著更少的實驗數(shù)量和重復性更好的實驗結(jié)果。不受光漂白的影響,熒光發(fā)射時間不受激發(fā)光強度的影響,因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。北京動物熒光壽命成像大概多少錢
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