影響熒光壽命成像測(cè)量的幾種因素：1．溫度影響：一般說(shuō)來(lái)，熒光隨溫度升高而強(qiáng)度減弱，溫度升高1℃，熒光強(qiáng)度下降1～10%不等。測(cè)定時(shí)，溫度必須保持恒定。 2．PH值影響：PH 值影響物質(zhì)的熒光，應(yīng)選擇較佳PH制備樣品。 3．光分解對(duì)熒光測(cè)定的影響： 熒光物質(zhì)吸收紫外可見(jiàn)光后，發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。因此，熒光分析要采用高靈敏度的檢測(cè)器，而不是用增強(qiáng)光源來(lái)提高靈敏度。測(cè)定時(shí)，用較窄的激發(fā)光部分的狹縫，以減弱激發(fā)光。同時(shí)，用較寬的發(fā)射狹縫引導(dǎo)熒光。熒光分析應(yīng)盡量在暗環(huán)境中進(jìn)行。熒光壽命成像可以體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息。深圳化學(xué)熒光壽命成像哪家實(shí)惠

熒光壽命成像是什么？如果分子環(huán)境刺激激發(fā)態(tài)衰變而不發(fā)射光子，則熒光強(qiáng)度會(huì)降低（淬滅）。熒光淬滅是一條單獨(dú)的發(fā)射路徑，因此在動(dòng)力學(xué)上與熒光過(guò)程形成競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。激發(fā)態(tài)存儲(chǔ)現(xiàn)在可以通過(guò)一個(gè)以上的過(guò)程衰變，從而縮短熒光壽命。這種壽命的改變可用于收集分子環(huán)境的信息。一種特殊類型的淬滅是將激發(fā)能量以非輻射的方式傳遞到相鄰的不同熒光染料中：“熒光共振能量轉(zhuǎn)移”，F(xiàn)RET。此時(shí)，不只第1個(gè)熒光染料（供體）變暗，壽命變短，而且第二個(gè)熒光染料（受體）在“錯(cuò)誤的”激發(fā)顏色下開始發(fā)光。由于這種效果的產(chǎn)生需要兩種熒光染料（小于10 nm）的密切接觸，因此將其用作研究分子相互作用的“分子標(biāo)尺”。它也是許多現(xiàn)代FRET生物傳感器的基礎(chǔ)。深圳化學(xué)熒光壽命成像哪家實(shí)惠熒光壽命成像（FLIM）對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及調(diào)控，蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。

熒光壽命成像顯微術(shù)(FLIM)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術(shù)。除了具有特有的發(fā)射光譜外，每個(gè)熒光分子還有特有的壽命，它反映了熒光基團(tuán)在發(fā)射光子之前處于激發(fā)態(tài)的時(shí)間。除了標(biāo)準(zhǔn)的熒光強(qiáng)度測(cè)量外，壽命分析還可以提供其他信息。過(guò)去，壽命成像一直是一種緩慢、復(fù)雜的專業(yè)化技術(shù)。只有經(jīng)驗(yàn)豐富的顯微鏡**或物理學(xué)家才會(huì)使用這種技術(shù)。熒光壽命成像提供了額外的信息，有助提高共聚焦成像的質(zhì)量。它非常適合用于區(qū)分熒光發(fā)射光譜重疊的熒光探針，或消除不需要的背景熒光信號(hào)。

熒光分析和成像技術(shù)因具有非常高的靈敏度和分子特異性而普遍的應(yīng)用于生物物理、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、物理、化學(xué)等領(lǐng)域，利用熒光光譜技術(shù)和熒光顯微技術(shù)可以分析樣品中熒光團(tuán)的組分和分布。不過(guò)，由于熒光分析技術(shù)大多是基于熒光強(qiáng)度的測(cè)量，容易受到激發(fā)光強(qiáng)度、樣品濃度淬滅、熒光染料的分布濃度等因素的影響。熒光壽命通常來(lái)講是一定的，不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響，只只與熒光團(tuán)所處的微環(huán)境有關(guān)，因此，利用熒光壽命顯微鏡（Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM）對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像，可以對(duì)樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學(xué)參數(shù)如pH值、離子濃度等進(jìn)行定量測(cè)量。此外，熒光壽命成像技術(shù)還可以同時(shí)獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。熒光壽命成像不需要考慮跳色的影響，從而免去了計(jì)算和去除跳色雜質(zhì)信號(hào)的麻煩；

與熒光光譜一樣，熒光壽命也是熒光物質(zhì)的一種內(nèi)在特有性質(zhì)，不受熒光物質(zhì)濃度、激發(fā)光強(qiáng)度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強(qiáng)度影響因素影響的條件下，在納米分辨率水平對(duì)蛋白互作進(jìn)行研究，或者通過(guò) FRET 探針研究分子環(huán)境變化，更重要的是其測(cè)量數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性高、易重復(fù)。通過(guò)熒光壽命成像還可以對(duì)樣本所處的微環(huán)境進(jìn)行檢測(cè)、對(duì)樣品組份進(jìn)行分離等等。在傳統(tǒng)的熒光強(qiáng)度和熒光光譜兩個(gè)維度的基礎(chǔ)上，又增加了熒光壽命這一新的成像維度，大幅度拓展了該系統(tǒng)的應(yīng)用范圍。熒光壽命成像可以用于無(wú)法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。深圳化學(xué)熒光壽命成像哪家實(shí)惠

隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。深圳化學(xué)熒光壽命成像哪家實(shí)惠

熒光壽命可以在頻域或者時(shí)間域測(cè)量。時(shí)間域測(cè)量方法涉及用短光脈沖照射樣品（比色皿、細(xì)胞或組織），然后隨時(shí)間測(cè)量發(fā)射強(qiáng)度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測(cè)方法可用于壽命測(cè)量，其中時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC）可實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單的數(shù)據(jù)收集和增強(qiáng)的定量光子計(jì)數(shù)。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調(diào)制。在該方法中，發(fā)射發(fā)生在與入射光相同的頻率處，并且隨著激發(fā)光兼有相位延遲和振幅的變化（解調(diào)）。壽命測(cè)量不需要波長(zhǎng)比率探針來(lái)提供眾多分析物的定量測(cè)定。壽命法通過(guò)使用光譜位移探針擴(kuò)展了分析物濃度范圍的靈敏度。壽命測(cè)量可用于沒(méi)有直接探針的分析物。包括葡萄糖、抗原或基于熒光能量轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的任何親和力或免疫測(cè)定。深圳化學(xué)熒光壽命成像哪家實(shí)惠

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