熒光壽命是熒光團(tuán)在發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前保持其激發(fā)態(tài)的平均時(shí)間長(zhǎng)度。這取決于熒光團(tuán)的分子組成和納米環(huán)境。熒光壽命成像將壽命測(cè)量與成像相結(jié)合：對(duì)每個(gè)圖像像素以測(cè)得的熒光壽命進(jìn)行顏色編碼，產(chǎn)生額外的圖像反差。因此，熒光壽命成像可以提供關(guān)于熒光分子空間分布的信息和有關(guān)其生化狀態(tài)或納米環(huán)境的信息。有很多技術(shù)可以在顯微鏡環(huán)境中檢測(cè)熒光壽命。常見的的是基于供體（受體光漂白，F(xiàn)RET AB）或受體（敏化發(fā)射，F(xiàn)RET SE）熒光強(qiáng)度的技術(shù)。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題，對(duì)生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)有著重要的意義。上海動(dòng)物熒光壽命成像使用方法

在基于時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)的熒光壽命成像實(shí)驗(yàn)中，通過選用超快激光器可以優(yōu)化脈沖持續(xù)時(shí)間，單光子探測(cè)器和時(shí)間數(shù)字轉(zhuǎn)換器的時(shí)間抖動(dòng)則成為制約時(shí)間分辨率的關(guān)鍵參數(shù)。熒光壽命成像可進(jìn)行高質(zhì)量的多色成像實(shí)驗(yàn)或?qū)崿F(xiàn)STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應(yīng)用的熒光壽命測(cè)定技術(shù)。熒光壽命通常在ps～us量級(jí)，在如此短的時(shí)間量級(jí)上進(jìn)行測(cè)量，它是較為成熟準(zhǔn)確的測(cè)試手段。TCSPC的工作原理是使用一個(gè)同步信號(hào)源驅(qū)動(dòng)激光器，出射光脈沖照射樣品池，在利用光子探測(cè)裝置（多為PMT）對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行探測(cè)，每一個(gè)光子計(jì)數(shù)信號(hào)在FT1010中都會(huì)落入一個(gè)對(duì)應(yīng)的時(shí)間窗口，經(jīng)過一定時(shí)間的統(tǒng)計(jì)疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬(wàn)次重復(fù)以后，不同的時(shí)間通道累積下來(lái)的光子數(shù)目不同。廣州植物熒光壽命成像價(jià)錢熒光壽命成像能夠靈敏地反應(yīng)熒光基團(tuán)生化特性以及周圍微環(huán)境的變化情況。

熒光壽命成像是什么？如果分子環(huán)境刺激激發(fā)態(tài)衰變而不發(fā)射光子，則熒光強(qiáng)度會(huì)降低（淬滅）。熒光淬滅是一條單獨(dú)的發(fā)射路徑，因此在動(dòng)力學(xué)上與熒光過程形成競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。激發(fā)態(tài)存儲(chǔ)現(xiàn)在可以通過一個(gè)以上的過程衰變，從而縮短熒光壽命。這種壽命的改變可用于收集分子環(huán)境的信息。一種特殊類型的淬滅是將激發(fā)能量以非輻射的方式傳遞到相鄰的不同熒光染料中：“熒光共振能量轉(zhuǎn)移”，F(xiàn)RET。此時(shí)，不只第1個(gè)熒光染料（供體）變暗，壽命變短，而且第二個(gè)熒光染料（受體）在“錯(cuò)誤的”激發(fā)顏色下開始發(fā)光。由于這種效果的產(chǎn)生需要兩種熒光染料（小于10 nm）的密切接觸，因此將其用作研究分子相互作用的“分子標(biāo)尺”。它也是許多現(xiàn)代FRET生物傳感器的基礎(chǔ)。

熒光壽命成像技術(shù)有兩種：時(shí)間域和頻率域。（1）時(shí)域FLIM：需要脈沖光源，所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM（熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡(jiǎn)稱FLIM），理由一是激光是脈沖的，二是買雙光子的老師一般也搭配一個(gè)FLIM。（2）頻域FLIM：需要一個(gè)相位調(diào)制的光源，有用LED調(diào)制的。熒光壽命成像FLIM的應(yīng)用：1）細(xì)胞體自身熒光壽命分析；2）自身熒光相對(duì)熒光標(biāo)記的有效區(qū)分；3）具有相同頻譜性質(zhì)的不同熒光標(biāo)記的區(qū)分；4）活細(xì)胞內(nèi)水介質(zhì)的PH值測(cè)量；5）局部氧氣濃度測(cè)量；6）活細(xì)胞內(nèi)鈣濃度測(cè)量；7）時(shí)間分辨Forster共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）：納米級(jí)尺度上的遠(yuǎn)程測(cè)量，環(huán)境敏感的FRET探針定量測(cè)量。熒光壽命成像可以提供有關(guān)電信號(hào)變化、離子和氧含量、溫度、細(xì)胞或其環(huán)境中的 pH 值的定量信息。

熒光壽命成像或FLIM是基于熒光樣品中不同區(qū)域的熒光的指數(shù)衰減速率的差異。由τ決定熒光壽命成像的每個(gè)像素的強(qiáng)度，這使研究人員可以查看具有不同熒光衰減率的材料之間的對(duì)比度，還可以產(chǎn)生顯示其他衰減路徑變化的圖像?？梢酝ㄟ^使用脈沖源在時(shí)域中確定熒光壽命。當(dāng)熒光物質(zhì)被超短脈沖激發(fā)時(shí)，時(shí)間分辨的熒光將呈指數(shù)衰減。時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（tcspc）通常被用作熒光壽命的測(cè)量方法，因?yàn)樗a(bǔ)償了在源強(qiáng)度和單光子的脈沖幅度的變化。更具體地說(shuō)，TCSPC由單個(gè)光子雪崩光電二極管（SPAD）記錄相對(duì)于激發(fā)激光脈沖的單個(gè)光子的壽命。重復(fù)記錄多個(gè)激光脈沖，并在記錄了足夠多的事件后，研究人員能夠建立所有這些記錄的時(shí)間點(diǎn)上事件數(shù)量的直方圖。然后，可以將該直方圖擬合到的指數(shù)壽命衰減函數(shù)的指數(shù)函數(shù)，并且可以相應(yīng)地提取壽命參數(shù)。熒光壽命成像是一種重要的熒光顯微鏡技術(shù)。廣州開放式熒光壽命成像多少錢

熒光壽命成像（FLIM）對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及調(diào)控，蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。上海動(dòng)物熒光壽命成像使用方法

熒光壽命成像在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷應(yīng)用中的許多場(chǎng)合都對(duì)多光譜分辨提出特殊要求，如在FRET測(cè)量中，要求能同時(shí)測(cè)量供體和受體的熒光強(qiáng)度隨時(shí)間的衰減，多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段．目前，基于門控像增強(qiáng)器的多光譜寬場(chǎng)FLIM 技術(shù)一次只能獲得至多兩個(gè)譜段的熒光壽命圖像，而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低，這些都限制了其應(yīng)用范圍．目前的一個(gè)研究方向是，發(fā)展光譜分辨率高、成像速度快、價(jià)格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術(shù)。上海動(dòng)物熒光壽命成像使用方法

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