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北京動物熒光壽命成像哪里買

來源: 發(fā)布時間:2022-07-04

熒光壽命成像顯微術(shù)(FLIM)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術(shù)。除了具有特有的發(fā)射光譜外,每個熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團(tuán)在發(fā)射光子之前處于激發(fā)態(tài)的時間。除了標(biāo)準(zhǔn)的熒光強(qiáng)度測量外,壽命分析還可以提供其他信息。過去,壽命成像一直是一種緩慢、復(fù)雜的專業(yè)化技術(shù)。只有經(jīng)驗豐富的顯微鏡**或物理學(xué)家才會使用這種技術(shù)。熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質(zhì)量。它非常適合用于區(qū)分熒光發(fā)射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號。熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。北京動物熒光壽命成像哪里買

熒光分析和成像技術(shù)因具有非常高的靈敏度和分子特異性而普遍的應(yīng)用于生物物理、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、物理、化學(xué)等領(lǐng)域,利用熒光光譜技術(shù)和熒光顯微技術(shù)可以分析樣品中熒光團(tuán)的組分和分布。不過,由于熒光分析技術(shù)大多是基于熒光強(qiáng)度的測量,容易受到激發(fā)光強(qiáng)度、樣品濃度淬滅、熒光染料的分布濃度等因素的影響。熒光壽命通常來講是一定的,不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響,只只與熒光團(tuán)所處的微環(huán)境有關(guān),因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對樣品進(jìn)行熒光壽命成像,可以對樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學(xué)參數(shù)如pH值、離子濃度等進(jìn)行定量測量。此外,熒光壽命成像技術(shù)還可以同時獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。安徽熒光壽命成像供貨商熒光壽命成像不受染料濃度的影響;

熒光壽命是熒光基團(tuán)在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時間不同,大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點(diǎn)對點(diǎn)的時間相關(guān)單光子計數(shù)(TCSPC),但由于過去檢測硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展,在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘柌杉臒晒鈮勖上癯蔀榭赡?。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。該圖形視圖使任何觀察者都能快速區(qū)分和分離FLIM圖像中的不同壽命種群。相量FLIM分布的解釋很簡單。因為每個物種都有特定的相量,所以可以在單個像素內(nèi)解析多個分子物種。相量圖如何生成?當(dāng)使用時間分辨單光子計數(shù)(TCSPC)系統(tǒng)獲取數(shù)據(jù)時,相量FLIM分布是從傅立葉變換中得出的(Digman等,2008)。圖像中的每個像素對應(yīng)于相量圖中的一個點(diǎn)。

熒光壽命成像 (FLIM)通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命??娠@示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測到的光子數(shù))。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,F(xiàn)LIM-FRET為內(nèi)部參照—這一特點(diǎn)減少了基于強(qiáng)度測量FRET時的很多缺點(diǎn)。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達(dá)水平)具有普遍的不變性。使用基于強(qiáng)度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設(shè)。通常情況并非如此。供體分子這種變化的“非結(jié)合”組分給測量的FRET效率帶來了相當(dāng)大的不確定性,使得無法在實驗之間進(jìn)行比較。熒光壽命成像克服了這一缺點(diǎn)。熒光壽命是微環(huán)境的相對參數(shù),不受環(huán)境吸收、樣本濃度等因素影響。

市場上熒光壽命的測量方式可分為時域法和頻域法,兩者在本質(zhì)上是相通的,測量精度相近,頻域技術(shù)是時域法的傅里葉變換的延伸。時域和頻域技術(shù)在各種顯微壽命成像平臺中都有應(yīng)用,時間相關(guān)單光子計數(shù)方法(TCSPC )是常見的時域技術(shù),而新興的數(shù)字頻域技術(shù)(FastFLIM? )則取代了傳統(tǒng)的模擬頻域技術(shù),憑借其獨(dú)恃的優(yōu)勢成為應(yīng)用廣的頻域技術(shù)。熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(shù)(Time-Correlated Single Photon Counting)實現(xiàn)。由于TCSPC系統(tǒng),一個激光脈沖只采集一個光子信號,所以激光器的重復(fù)頻率決定了系統(tǒng)的數(shù)據(jù)采集速度。重頻越高,采集速度越快,數(shù)據(jù)信噪比越好。熒光壽命顯微成像,可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導(dǎo)體領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價值。熒光壽命成像是干什么的

熒光壽命成像可以體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息。北京動物熒光壽命成像哪里買

熒光壽命成像技術(shù)實時監(jiān)控納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性:利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實現(xiàn)可以實時監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性。熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn),它在監(jiān)控?zé)晒饧{米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個優(yōu)勢:(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細(xì)胞分化導(dǎo)致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響;(2)很多常見的發(fā)光材料的熒光壽命都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于細(xì)胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾;(3)發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關(guān),熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應(yīng)材料的化學(xué)穩(wěn)定性。北京動物熒光壽命成像哪里買

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