市場(chǎng)上熒光壽命的測(cè)量方式可分為時(shí)域法和頻域法，兩者在本質(zhì)上是相通的，測(cè)量精度相近，頻域技術(shù)是時(shí)域法的傅里葉變換的延伸。時(shí)域和頻域技術(shù)在各種顯微壽命成像平臺(tái)中都有應(yīng)用，時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)方法（TCSPC )是常見的時(shí)域技術(shù)，而新興的數(shù)字頻域技術(shù)（FastFLIM? )則取代了傳統(tǒng)的模擬頻域技術(shù)，憑借其獨(dú)恃的優(yōu)勢(shì)成為應(yīng)用廣的頻域技術(shù)。熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(shù)（Time-Correlated Single Photon Counting）實(shí)現(xiàn)。由于TCSPC系統(tǒng)，一個(gè)激光脈沖只采集一個(gè)光子信號(hào)，所以激光器的重復(fù)頻率決定了系統(tǒng)的數(shù)據(jù)采集速度。重頻越高，采集速度越快，數(shù)據(jù)信噪比越好。熒光壽命顯微成像是熒光壽命測(cè)量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合。紅外熒光壽命成像供貨商

受光學(xué)衍射極限的限制，熒光顯微技術(shù)的空間分辨率只能達(dá)到200納米左右，難以滿足生命科學(xué)研究的需要。而對(duì)于熒光壽命成像來說，其空間分辨率受衍射極限的影響尤為嚴(yán)重。熒光壽命成像是一個(gè)新興的研究領(lǐng)域，尋求具有高度原創(chuàng)性的技術(shù)原理與方案，并率先解決熒光壽命成像在生命科學(xué)應(yīng)用中存在的難題，具有重大的科學(xué)意義與應(yīng)用價(jià)值。一種熒光壽命成像方法，所述方法包括下述步驟：對(duì)標(biāo)記于樣品中的光開關(guān)染料分子進(jìn)行稀疏激勵(lì)；激發(fā)樣品中被激勵(lì)的光開關(guān)染料分子，收集被激發(fā)的光開關(guān)染料分子所發(fā)射的光子并記錄光開關(guān)染料分子的熒光圖像，對(duì)熒光圖像中的光開關(guān)染料分子進(jìn)行質(zhì)心定位；對(duì)在質(zhì)心定位處接收到的光子進(jìn)行計(jì)數(shù)，確定被激發(fā)的光開關(guān)染料分子的熒光壽命；結(jié)合得到的光開關(guān)染料分子的質(zhì)心定位結(jié)果和熒光壽命，構(gòu)建熒光壽命圖像。深圳多色熒光壽命成像怎么用熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。

新技術(shù)和新概念的發(fā)展促進(jìn)了數(shù)據(jù)評(píng)估，意味著熒光壽命成像(FLIM)的速度提高了10倍，可以媲美標(biāo)準(zhǔn)共聚焦成像，且操作簡(jiǎn)單。熒光過程提供了兩個(gè)用于成像的測(cè)量參數(shù)：強(qiáng)度和熒光壽命。熒光壽命是指分子停留在激發(fā)態(tài)的時(shí)間。可以通過觀察足夠大量的激發(fā)-發(fā)射事件集中來測(cè)量熒光染料的典型壽命。我們可以測(cè)量圖像中所有像素的典型壽命，并將這些數(shù)字記入數(shù)組元素。那就是熒光壽命成像。典型的熒光壽命范圍在0.2到20納秒之間。熒光壽命與熒光染料的濃度無關(guān)。無論樣品結(jié)構(gòu)只有零星熒光染料還是載滿熒光染料：壽命信號(hào)始終相同，并表明在同一環(huán)境中存在相同的熒光染料。因此，熒光壽命不受光漂白的影響。樣品深處的圖像將比表面圖像暗得多——但壽命并沒有改變。這是壽命測(cè)定的主要優(yōu)勢(shì)。

熒光壽命成像：作為熒光成像中除光譜和強(qiáng)度之外的新維度，當(dāng)前，熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括：用于樣品分離，如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細(xì)胞等有效分離。熒光團(tuán)在光譜上非常相似（max 580 vs 573）無法分離，但它們?cè)跓晒鈮勖喜町惷黠@。作為生物傳感器，如評(píng)價(jià)藥物/理化條件對(duì)細(xì)胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍，實(shí)現(xiàn)可相互驗(yàn)證的多維度樣品成像。實(shí)現(xiàn)真正的生物動(dòng)力學(xué)分析和功能成像。熒光壽命成像可以體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息。

熒光壽命成像（Fluorescence Lifetime Imaging ，F(xiàn)LIM)）是一種重要的熒光顯微鏡技術(shù)，通常用于研究生物分子間相互作用、細(xì)胞中的信號(hào)事件或區(qū)分光譜重疊的熒光團(tuán)。此外，F(xiàn)LIM 可以提供有關(guān)電信號(hào)變化、離子和氧含量、溫度、細(xì)胞或其環(huán)境中的 pH 值的定量信息。熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn)：不受染料濃度的影響，無論染色或免疫熒光的效率高或低，熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù)，這意味著更少的實(shí)驗(yàn)數(shù)量和重復(fù)性更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。不受光漂白的影響，熒光發(fā)射時(shí)間不受激發(fā)光強(qiáng)度的影響，因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時(shí)間不同，大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時(shí)間在 0.2 - 20 ns。佛山分子熒光壽命成像價(jià)錢

熒光壽命成像通常用于研究生物分子間相互作用、細(xì)胞中的信號(hào)事件或區(qū)分光譜重疊的熒光團(tuán)。紅外熒光壽命成像供貨商

熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn)：在數(shù)據(jù)處理上，由于曲線擬合迭代過程的需求，計(jì)算成本較其他成像方案更高。在成像原理上，熒光壽命受多種外界因素影響，這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等，很難對(duì)這些參數(shù)控制變量，使得測(cè)量熒光壽命存在交叉干擾問題。此外，與普通光學(xué)顯微技術(shù)類似，介質(zhì)光散射影響成像信噪比及空間分辨率，成像深度受到限制。FLIM已經(jīng)在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數(shù)據(jù)處理算法等方面得到了較快的發(fā)展，這也使得熒光壽命成像FLIM在對(duì)細(xì)胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測(cè)發(fā)揮出不可替代的作用。結(jié)合多種先進(jìn)成像系統(tǒng)，如雙光子成像、結(jié)構(gòu)光照明等，可進(jìn)一步提升熒光壽命成像FLIM的分辨率和測(cè)量精度。另一方面，提升熒光壽命解調(diào)的算法性能，將壓縮感知、深度學(xué)習(xí)等熱點(diǎn)算法與FLIM結(jié)合，也同樣對(duì)FLIM的發(fā)展起著至關(guān)重要的作用?？偟膩碚f，熒光壽命成像FLIM的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題，對(duì)生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)有著重要的意義。紅外熒光壽命成像供貨商

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