熒光壽命是熒光分子在激發(fā)態(tài)停留的時間，這個時間可以反映熒光分子的內在屬性和所處的微環(huán)境，是一個很有用的工具。以往，熒光壽命的測量和計算是件非常復雜和耗時的工作，只有少數專業(yè)的科學家關注和使用該工具。傳統(tǒng)的多色成像實驗根據光譜差異來設計，會有串色等限制，而且需要多次采集圖像，會造成樣品的光損傷。通過熒光壽命來進行成像，只需要拍攝一次就完成圖像采集，不但減少了成像時間，而且降低了激光對樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單，方便快捷，不需要進行參數調節(jié)。熒光壽命檢測經典方法為點對點的時間相關單光子計數（TCSPC）。上海分子熒光壽命成像哪家靠譜

熒光顯微技術具有無損、非接觸、高特異性、高靈敏、高體友好以及能夠提供功能信息等突出優(yōu)點，一直是生命科學，尤其是細胞生物學研究的重要工具。近年來，隨著生命科學的發(fā)展，對熒光顯微技術也提出了越來越高的要求，激光技術、熒光探針標記技術、新型熒光探測技術和成像手段的不斷發(fā)展，極大地促進了熒光顯微技術的發(fā)展，成為推動生命科學發(fā)展的重要動力。此外，熒光顯微技術也在成像的對比機制方面獲得了很大的進展。超分辨(SR)成像技術的發(fā)展，也為熒光壽命成像(FLIM)的新發(fā)展提供了巨大的機遇。杭州熒光壽命成像一般多少錢熒光壽命成像在生物醫(yī)學領域有廣闊的應用前景。

熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn)：在數據處理上，由于曲線擬合迭代過程的需求，計算成本較其他成像方案更高。在成像原理上，熒光壽命受多種外界因素影響，這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等，很難對這些參數控制變量，使得測量熒光壽命存在交叉干擾問題。此外，與普通光學顯微技術類似，介質光散射影響成像信噪比及空間分辨率，成像深度受到限制。FLIM已經在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數據處理算法等方面得到了較快的發(fā)展，這也使得熒光壽命成像FLIM在對細胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測發(fā)揮出不可替代的作用。結合多種先進成像系統(tǒng)，如雙光子成像、結構光照明等，可進一步提升熒光壽命成像FLIM的分辨率和測量精度。另一方面，提升熒光壽命解調的算法性能，將壓縮感知、深度學習等熱點算法與FLIM結合，也同樣對FLIM的發(fā)展起著至關重要的作用?？偟膩碚f，熒光壽命成像FLIM的發(fā)展很好地彌補了基于強度成像的問題，對生物醫(yī)學檢測有著重要的意義。

熒光壽命成像FLIM在生物學上的應用根據熒光分子種類可以分為三種：分別為自發(fā)熒光FLIM、外源分子探針FLIM和FRET-FLIM。自發(fā)熒光FLIM被普遍應用于非標記生物成像領域。所謂自發(fā)熒光，即生物細胞本身便包含熒光分子，稱為內源性熒光分子團。FLIM通過對自發(fā)熒光分子團（如NAD(P)H和FAD）熒光壽命的考察，可以實現細胞代謝的監(jiān)測。這種方案無需人為對樣品加入熒光試劑便可以發(fā)射熒光，有效減少了熒光染料對樣品的毒性、熒光分子與樣品的非特異性結合及染料對生理性能的干擾影響。熒光壽命是用于幾種生物測定的穩(wěn)健參數。

熒光壽命成像技術有兩種：時間域和頻率域。（1）時域FLIM：需要脈沖光源，所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM（熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM），理由一是激光是脈沖的，二是買雙光子的老師一般也搭配一個FLIM。（2）頻域FLIM：需要一個相位調制的光源，有用LED調制的。熒光壽命成像FLIM的應用：1）細胞體自身熒光壽命分析；2）自身熒光相對熒光標記的有效區(qū)分；3）具有相同頻譜性質的不同熒光標記的區(qū)分；4）活細胞內水介質的PH值測量；5）局部氧氣濃度測量；6）活細胞內鈣濃度測量；7）時間分辨Forster共振能量轉移（FRET）：納米級尺度上的遠程測量，環(huán)境敏感的FRET探針定量測量。熒光壽命成像（FLIM）對細胞信號傳導及調控，蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。上海分子熒光壽命成像哪家靠譜

熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。上海分子熒光壽命成像哪家靠譜

在基于時間相關單光子計數的熒光壽命成像實驗中，通過選用超快激光器可以優(yōu)化脈沖持續(xù)時間，單光子探測器和時間數字轉換器的時間抖動則成為制約時間分辨率的關鍵參數。熒光壽命成像可進行高質量的多色成像實驗或實現STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應用的熒光壽命測定技術。熒光壽命通常在ps～us量級，在如此短的時間量級上進行測量，它是較為成熟準確的測試手段。TCSPC的工作原理是使用一個同步信號源驅動激光器，出射光脈沖照射樣品池，在利用光子探測裝置（多為PMT）對熒光信號進行探測，每一個光子計數信號在FT1010中都會落入一個對應的時間窗口，經過一定時間的統(tǒng)計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復以后，不同的時間通道累積下來的光子數目不同。上海分子熒光壽命成像哪家靠譜

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