熒光壽命顯微成像（Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM）是熒光壽命測量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合，熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強度和光漂白影響等優(yōu)點。在過去的十年中，光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，共同促進了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進步。熒光壽命成像（FLIM）對細胞信號傳導(dǎo)及調(diào)控，蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。熒光壽命成像技術(shù)有兩種：時間域和頻率域。廣州動物熒光壽命成像報價

熒光分子受激發(fā)后發(fā)光，熒光壽命量化了發(fā)光的衰減率。該特征時間不但取決于特定的熒光團，還取決于其環(huán)境，分子相互作用影響弛豫過程并改變熒光團的壽命。熒光壽命是微環(huán)境的相對參數(shù)，不受環(huán)境吸收、樣本濃度等因素影響，因此能夠?qū)ι锝M織環(huán)境中的 p H 值水平、離子濃度、氧分子濃度等微環(huán)境狀態(tài)進行高精度檢測。熒光壽命顯微成像（FLIM），可以定位不同的分子及濃度分布，在生物，材料，半導(dǎo)體領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價值。熒光壽命成像原理及應(yīng)用說明：熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時間，處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境，通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。江蘇多色熒光壽命成像有哪些熒光壽命對依賴于熒光團結(jié)構(gòu)的內(nèi)部因素敏感。

熒光壽命成像可以提供熒光強度（光子數(shù)）和光子壽命的空間分布，具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發(fā)（結(jié)合飛秒脈沖和共焦顯微鏡）可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術(shù)，無需解剖或?qū)ｉT制造分層樣品，不但可在樣品表面，還可在樣品表面以下實現(xiàn)深度解析測量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計優(yōu)化。熒光壽命成像圖像中每一個像素點在phasor圖上都有一個對應(yīng)的點。因此我們可以獲取每個像素點的壽命信息，也可以獲知每一壽命所對應(yīng)的圖像區(qū)域。

熒光壽命成像和生物發(fā)光的異同點是什么？生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點：產(chǎn)生光子的原理不同，類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣，生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上，都是機體中特定的細胞或材料發(fā)出光子，被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像，但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過程和機制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點：都需要對細胞進行標(biāo)記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像，就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。除此之外，生物發(fā)光和熒光壽命成像都需要對目標(biāo)細胞進行標(biāo)記，讓細胞產(chǎn)生熒光素酶或者熒光蛋白。熒光壽命成像使用簡單，方便快捷，不需要進行參數(shù)調(diào)節(jié)。

熒光壽命是熒光基團在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團激發(fā)態(tài)停時間不同，大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點對點的時間相關(guān)單光子計數(shù)（TCSPC），但由于過去檢測硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘柌杉臒晒鈮勖上癯蔀榭赡?。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。該圖形視圖使任何觀察者都能快速區(qū)分和分離FLIM圖像中的不同壽命種群。相量FLIM分布的解釋很簡單。因為每個物種都有特定的相量，所以可以在單個像素內(nèi)解析多個分子物種。相量圖如何生成？當(dāng)使用時間分辨單光子計數(shù)（TCSPC）系統(tǒng)獲取數(shù)據(jù)時，相量FLIM分布是從傅立葉變換中得出的（Digman等，2008）。圖像中的每個像素對應(yīng)于相量圖中的一個點。隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘柌杉臒晒鈮勖上癯蔀榭赡?。江蘇多色熒光壽命成像有哪些

熒光壽命是微環(huán)境的相對參數(shù)，不受環(huán)境吸收、樣本濃度等因素影響。廣州動物熒光壽命成像報價

門控探測法適用于單組分熒光強度衰減的測量和熒光壽命成像。熒光壽命可通過在兩個不同延遲時刻開啟的相同寬度的門內(nèi)記錄的熒光強度信息求得，通常情形下，在條件允許的情況下，采用多門控探測，即選取多個窗口獲取多幅圖像（通常為5~10幅）來反演壽命圖像。一般使用門控微通道板像增強器（MCP Intensifier）或者增強型CCD（Intensified CCD）相機，實現(xiàn)樣品的寬場（full-field）熒光壽命成像。通過在樣品受到超短光脈沖激發(fā)后的不同時刻（時間窗口）選通像增強器或CCD相機，獲得一組熒光強度圖像，然后利用公式，逐點計算出樣品上各點的熒光壽命并成像。廣州動物熒光壽命成像報價

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