熒光顯微技術(shù)具有無(wú)損、非接觸、高特異性、高靈敏、高體友好以及能夠提供功能信息等突出優(yōu)點(diǎn)，一直是生命科學(xué)，尤其是細(xì)胞生物學(xué)研究的重要工具。近年來(lái)，隨著生命科學(xué)的發(fā)展，對(duì)熒光顯微技術(shù)也提出了越來(lái)越高的要求，激光技術(shù)、熒光探針標(biāo)記技術(shù)、新型熒光探測(cè)技術(shù)和成像手段的不斷發(fā)展，極大地促進(jìn)了熒光顯微技術(shù)的發(fā)展，成為推動(dòng)生命科學(xué)發(fā)展的重要?jiǎng)恿?。此外，熒光顯微技術(shù)也在成像的對(duì)比機(jī)制方面獲得了很大的進(jìn)展。超分辨(SR)成像技術(shù)的發(fā)展，也為熒光壽命成像(FLIM)的新發(fā)展提供了巨大的機(jī)遇。影響熒光壽命成像測(cè)量的因素有哪些？吉林單分子熒光壽命成像

典型的熒光壽命成像包括從感興趣區(qū)域（ROI）的共焦圖像中提取1-，2-或3-衰減時(shí)間。限制熒光團(tuán)的衰減速率可能是任意的，而且很復(fù)雜，因?yàn)樵诩?xì)胞環(huán)境中存在幾種衰減速率。對(duì)于相量圖，關(guān)于選擇哪種衰減模型以及評(píng)估擬合優(yōu)度的挑戰(zhàn)性決定已成為過(guò)去。在相量圖中，所有原始FLIM數(shù)據(jù)在向量空間中均表示為相位和幅度。圖像中的每個(gè)像素都轉(zhuǎn)換為相量圖中的一個(gè)點(diǎn)。單獨(dú)于其在圖像中的位置，具有相似衰減特征的像素在相量圖中形成群集?？梢栽诖岁嚵兄羞x擇不同的相量簇，并在標(biāo)注中反向注釋對(duì)應(yīng)的像素。浙江紅外熒光壽命成像供貨商熒光壽命可以在頻域或者時(shí)間域測(cè)量。

熒光壽命成像中的熒光壽命及其含義：假定一個(gè)無(wú)限窄的脈沖光(δ函數(shù))激發(fā)n0個(gè)熒光分子到其激發(fā)態(tài)，處于激發(fā)態(tài)的分子將通過(guò)輻射或非輻射躍遷返回基態(tài)。假定兩種衰減躍遷速率分別為Γ和knr，則激發(fā)態(tài)衰減速率可表示為：其中n(t)表示時(shí)間t時(shí)激發(fā)態(tài)分子的數(shù)目，由此可得到激發(fā)態(tài)物種的單指數(shù)衰減方程。熒光壽命定義為衰減總速率的倒數(shù)：熒光強(qiáng)度正比于衰減的激發(fā)態(tài)分子數(shù)，因此可將上式改寫為：其中I0是時(shí)間為零時(shí)的熒光強(qiáng)度，τ為熒光壽命。也就是說(shuō)熒光強(qiáng)度衰減到初始強(qiáng)度的1/e時(shí)所需要的時(shí)間就是該熒光物種在測(cè)定條件下的熒光壽命。實(shí)際上用熒光強(qiáng)度的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作圖，直線斜率即為熒光壽命倒數(shù)的負(fù)值。熒光壽命也可以理解為熒光物種在激發(fā)態(tài)的統(tǒng)計(jì)平均停留時(shí)間。事實(shí)上當(dāng)熒光物質(zhì)被激發(fā)后有些激發(fā)態(tài)分子立即返回基態(tài)，有的甚至可以延遲到5倍于熒光壽命時(shí)才返回基態(tài)，這樣就形成了實(shí)驗(yàn)測(cè)定的熒光強(qiáng)度衰減曲線。

熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度（光子數(shù)）和光子壽命的空間分布，具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。通過(guò)雙光子激發(fā)（結(jié)合飛秒脈沖和共焦顯微鏡）可以直接檢測(cè)熒光和時(shí)間分辨的熒光壽命。這種無(wú)損檢測(cè)技術(shù)，無(wú)需解剖或?qū)ｉT制造分層樣品，不但可在樣品表面，還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測(cè)量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計(jì)優(yōu)化。熒光壽命成像圖像中每一個(gè)像素點(diǎn)在phasor圖上都有一個(gè)對(duì)應(yīng)的點(diǎn)。因此我們可以獲取每個(gè)像素點(diǎn)的壽命信息，也可以獲知每一壽命所對(duì)應(yīng)的圖像區(qū)域。熒光壽命成像技術(shù)是一種在顯微尺度下展現(xiàn)熒光壽命空間分布的技術(shù)。

門控探測(cè)法適用于單組分熒光強(qiáng)度衰減的測(cè)量和熒光壽命成像。熒光壽命可通過(guò)在兩個(gè)不同延遲時(shí)刻開啟的相同寬度的門內(nèi)記錄的熒光強(qiáng)度信息求得，通常情形下，在條件允許的情況下，采用多門控探測(cè)，即選取多個(gè)窗口獲取多幅圖像（通常為5~10幅）來(lái)反演壽命圖像。一般使用門控微通道板像增強(qiáng)器（MCP Intensifier）或者增強(qiáng)型CCD（Intensified CCD）相機(jī)，實(shí)現(xiàn)樣品的寬場(chǎng)（full-field）熒光壽命成像。通過(guò)在樣品受到超短光脈沖激發(fā)后的不同時(shí)刻（時(shí)間窗口）選通像增強(qiáng)器或CCD相機(jī)，獲得一組熒光強(qiáng)度圖像，然后利用公式，逐點(diǎn)計(jì)算出樣品上各點(diǎn)的熒光壽命并成像。熒光壽命成像這種技術(shù)相對(duì)較新，涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。廣東熒光壽命成像費(fèi)用

熒光壽命成像不受染料濃度的影響；吉林單分子熒光壽命成像

作為熒光成像中除光譜和強(qiáng)度之外的新維度，當(dāng)前，熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括：用于樣品分離，如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細(xì)胞等有效分離。熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度（光子數(shù)）和光子壽命的空間分布，具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。通過(guò)雙光子激發(fā)可以直接檢測(cè)熒光和時(shí)間分辨的熒光壽命。這種無(wú)損檢測(cè)技術(shù)，無(wú)需解剖或?qū)ｉT制造分層樣品，不但可在樣品表面，還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測(cè)量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計(jì)優(yōu)化。吉林單分子熒光壽命成像

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